河北省石家庄一中研究性学习“优秀小论文”高二生物：迷你玫瑰快繁体系的建立与优化.docVIP

迷你玫瑰快繁体系的建立与优化 石家庄市第一中学 马梦璇 指导教师： 何万红 迷你玫瑰快繁体系的建立与优化 【摘要】 利用植物组织培养技术，在以迷你玫瑰茎段为外植体获得无菌苗的基础上，采用人工配制的培养基，给予适宜的培养条件，诱发产生愈伤组织、根和芽等，进而培育成完整的植株，获得了较高的植株增殖系数，建立并优化了迷你玫瑰快速繁殖体系。 关键词：玫瑰；愈伤组织；组织培养； 一、本研究的意义 迷你玫瑰自然培育的周期长，盛花期短，花的产量也不能满足市场的需求，影响了其经济效益，利用组织培养技术对优良品种的迷你玫瑰进行大量的快速无性繁殖，通过实验探究出适宜的激素配比浓度，进而最大限度的提高植株的扩增系数，并且结合良好的生根效果，获得可以快速繁殖的优化植株体系，进而达到能够进行工厂化生产的要求。从而为人们创造出巨大的经济效益和社会效益。 二、实验过程 1. 实验材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 供试植物 盆栽迷你玫瑰植物 1.1.2主要仪器 超净工作台，恒温光照培养箱，高压消毒锅，接种针，培养皿，锥形瓶，天平等 1.1.3 主要试剂 次氯酸钠，70﹪酒精，氨苄青霉素，α-萘乙酸(NAA), 6-苄氨基嘌呤(6-BA), 吲哚丙酸(IBA), 蒸馏水等 1.1.4 主要溶液的配置 MS培养基配方 母液 试剂 用量（㎎/L） 大量元素(母液Ⅰ) NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2·2H2O 440 MgSO4·7H2O 370 KH2PO4 170 微量元素(母液Ⅱ) KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MoO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 铁盐(母液Ⅲ) Na2-EDTA·2H2O 37.3 FeSO4·7H2O 27.8 有机成分(母液Ⅳ) VB烟酸 0.5 盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5 盐酸硫胺素(维生素B1) 0.5 甘氨酸 2 肌醇 0.1 根据组织培养时不同时期、不同目的的需要，MS培养基中还要加入吲哚丙酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液。 1.2 实验方法 首先需要获得无菌苗，然后利用植物组织培养技术，对迷你玫瑰的外植体进行初代培养以及试管苗的继代培养。离体繁殖产生的芽、嫩梢和嫩茎，进一步诱导生根，得到完整的植株。本项目的技术流程见图2。 1.3 实验步骤 1.3.1 培养基的配制和灭菌 根据MS培养基的配制方法制备所需的基本培养基，生根培养基中加入萘乙酸NAA和吲哚丙酸IBA，扩增培养基中加入萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA)，根据两种培养基中激素的不同浓度，制一系列具有浓度梯度的培养基备用。 1.3.2 培养材料的采集 在本实验中采取的是幼叶，切块在0.5厘米左右。 1.3.3 培养材料的消毒 ①.先将材料用流水洗净，最后用蒸馏水冲洗，用无菌吸水纸将水分吸干，再用消毒刀片将材料切成小块。 ②.在无菌条件下，将材料放入70﹪酒精中浸泡30秒。 ③.再将材料放入0.01﹪升汞中浸泡，共设6 个处理分别为：2、3、6、9分钟。消毒处理时添加2～3 滴吐温，以便材料和消毒剂接触充分。 ④.用无菌水冲洗3-4次，最后用无菌滤纸吸干材料表面水分。 1.3.4 接种培养 将已消毒的材料在无菌环境下切成0.3厘米左右厚的小片，得到外植体。 1.3.5 继代增殖培养 将无菌苗接种在MS+ 6-BA + NAA 的培养基上，光照强度2000 LX， 每天光照 14小时，温度 25℃，培养3-4周后，观察并统计扩增效果，然后将扩增的从苗分株，分别转接到各组生根培养基中。 1.3.6 生根培养 将无根苗转到 MS + NAA + IBA的培养基上，观察生根效果，并进行统计。 1.3.7 炼苗 移栽前，打开瓶塞，在温室强光下练苗 2-3天，将生根苗的根部培养基洗净，然后栽植于移栽基质，消毒后进行试管苗的移栽，相对湿度保持在 90% 以上，温度 25℃，栽后每天用自来水喷雾 1-2 次，每周浇 1/2MS营养液一次，并喷洒多菌灵防杂菌。10-15天后长出新根、新叶。 1.3.8 转盆 炼苗40-50天后，上盆栽培。 2. 结果与分析 2.1 无菌体系的建立 迷你玫瑰外植体接种到初步培养基上，在培养7-20 天，有些外植体萌发新芽并无污染，有些外植体材料萌发新芽但污染，还有一些外植体尽管没有污染但也无新芽萌动生长，最后干枯死亡，死亡的原因可能是采用升汞消毒时，对外植体造成