实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量[精选].ppt

实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量 一、实验原理 糖类包括多糖、双糖和单糖，其中单糖和某些双糖具有游离的羰基，称为还原糖，多糖和蔗糖无还原性。利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定.非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 二、试剂与材料 1、斐林试剂 甲 69.3g CuSO4.5H2O 1000ml 50ml/组 乙 346g 酒石酸钾钠+100gNaOH 1000ml 50ml/组 2、1%次甲基蓝 1g次甲基蓝+100ml水/班 棕色瓶保存 3、0.2%标准G 2gG105℃烘干到恒重加水到 1000ml 2000ml/班 4、碱式滴定管 5、样品溶液：待测G液 样品1：稀释20倍，1000ml /班 样品2：稀释50倍，1000ml /班 6、电炉 三、操作方法 1、斐林试剂标定 A 取甲液5ml+乙液5ml，（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶）置于250ml三角瓶中，加入10ml水，并从滴定管中加入0.2%的标准G若干毫升（约23ml） 。（量控制在后滴定时消耗G在0.5－1.0ml) B 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2%标准G滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的G量为V0,必须在1min内完成。 注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。 2、定糖预备试验 同1法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%G滴定至蓝色消失。记录耗用的G量为V1 3、样品中还原糖测定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0—V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml 0.2%G，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用G滴定至蓝色消失。记录消耗的标准G体积为V毫升。 四、结果计算 还原糖含量(以G计) （ g/ml) =（Vo-V) *0.002 *1/10 * n 式中Vo-------- 斐林试剂标定值，ml V--------- 样品糖液测定值，ml 0.002----- 标准GS液浓度，g/ml 10-------- 样品糖液体积，ml n--------- 样品稀释倍数 五、注意事项 本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中的乳糖，则可以认为还原糖=某糖。 分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖，则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含量。如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。 五、分析讨论 六、思考题： 1、查阅资料还原糖测定检测方法有哪些？其原理是什么？ 2、总结本实验方法检测还原糖应注意哪些事项？ * *