植物组织培养33018324要点.ppt

植物组织培养 plant tissue culture 繁 殖 技 术 植物组织培养 基础知识 概念 历史 原理 实验技术 实验室组成 操作程序 发展技术 基础知识 指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。 基础知识 植物组织培养的概念 优点： 繁殖系数大 繁殖快 去病毒，节省土地 培养基 1937年，美国科学家White等人改进了培养基，结果培养的细胞开始分裂，堆积成一团菜花状瘤状物，即愈伤组织，但没能继续分化为根、茎、叶等器官。后来研究发现，只有在培养基中加入适当比例的细胞分裂素和植物生长素，愈伤组织才能分化出芽和根。 。。。。。。 1958年，Steward由胡萝卜韧皮部组织诱出愈伤组织，再由愈伤组织分化成小苗，证明了高等植物活细胞具有分化全能性。 。。。。。。 1962年Marshing和Shong发明了MS培养基。? 1967年Maths发现白杨在组织培养过程中，产生的化学物能抑制霉及细菌的生长。Khanna和Staba从悬浮或静止培养基中分离植物组织，发现其中具有抗微生物（抗菌剂活跃）活性者高达百分之八十。　　　　　　　　　　　 1971年，Ra-jasekbar认为组织在不同情况下培养，会产生不同的代谢产物以影响组织的生长。 三、植物组织培养的原理 “细胞的全能性” 四、植物组织培养的应用 在植物快速繁殖和脱毒上的应用 在植物种质资源保存上的应用 在植物育种上的应用 单倍体育种 胚胎培养 细胞融合 基因工程 培养细胞突变体 培养过程中代谢产物的利用 在遗传、生理、生化和病理研究上的应用 一、组培设备 1、准备室 仪器和设备 ； 药品 1、准备室 仪器和设备 ； 药品 2、接种室 l??????? 仪器和设备 超净工作台、酒精灯、定时钟等 l??????? 药品 酒精、次氯酸钠等 3、培养室 不锈钢培养架（组培专用灯）、光照培养箱 4、练苗室 （一）、涉及的基本概念 1.外植体explant : 用于植物组织培养的离体材料称为外植体 。 2.分化differentiation 细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在发育中形成各类组织和器官，完成整个生活周期。 ? 3.脱分化dedifferentiation 将植物的根、茎、叶等器官进行离体培养时、这些器官中已分化的有特定结构和功能的细胞，将会逐渐丧失原有分化状态，而恢复细胞分裂机能，形成无组织结构、无器官分化的薄壁细胞团。此时形成的薄壁细胞团称为愈伤组织. 3.再分化redifferentiation 新形成的愈伤组织，经过一段时间的培养，会产生一些分生细胞团，随后由它再分化为具有特定结构和功能的组织或器官，如根和不定芽。 4. 胚状体embroid 对应于胚embryo，在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。 5.培养基medium 人工配制的适合植物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，其中含有所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生长因素，但不同营养类型、不同种类的植物对营养元素的要求又有较大差异。 6.继代培养subculture 愈伤组织在培养基上培养一段时期之后，便因养分缺乏或本身分泌一种植物毒素，使它不能再生长，因此必须移入新的培养基。 （二）具体流程简介 实验开始啦 ——配制培养基 植物组织培养的培养基 无机营养物质：植物所必需的大量元素及微量元素 有机营养物质 ① 含N物质：包括维生素和氨基酸 ② 碳源：2%—5%的蔗糖 ③ 琼脂：起凝固支持作用 植物生长调节剂：（生长素，细胞分裂素） PH值：5.0－6.0 2、外植体选取与灭菌 选材考虑因素： 取哪部分器官或组织最合适 部分器官或组织的生理状态，发育年龄 取材季节 材料大小 外植体的两种类型： A.带芽的外植体如茎尖和侧芽 B.分化的组织：茎段，叶，根，花瓣等 外植体表面灭菌 从室外带回来的材料．除去一些不必要的部分．洗去泥土．然后用皂液或洗衣粉及消洗灵浸泡，冲洗，必要时可用软刷刷洗材料，然