12.酶法分析重点.pptVIP

第12章 酶法分析 1.酶法分析的发展 酶在定量分析中的应用可以追溯到19世纪中期。当时，曾采用麦芽提取物作为过氧化物酶源，以愈创木酚作为共底物或指示剂测定过氧化氢。 早在1914年临床上就开始采用脲酶测定尿中的尿素，但是在临床实验室中酶分析的真正突破要推迟到1958年，当时转氨酶分析发展成为诊断肝病和心脏病的一个有效手段。 到了20世纪50年代前已有60种物质能借助于酶法分析。近年来，酶法分析发展迅速，广泛应用于临床检验、食品、环境、生物及其它样品的检测。 2. 酶法分析的特点及应用类型 酶的特性 12.2 酶法分析的方法及应用示例 一.酶活性的测定: 1.初速率法 2.固定时间分析法 3.固定变化分析法 4.偶联法 5.分光光度法及荧光法 6.电化学法 7.其它方法 1.初速率法 2.固定时间分析法 （动力学研究方法）无连续检测设备时，采用间隔一定时间，取出一定体积反应液并终止酶作用进行分析。 要求： 酶活性在催化过程中几乎没变化； 要采用使酶钝化的措施：一般用强酸、强碱、三氯乙酸、过氯酸或SDS使酶失活，也可以用加热的方法终止反应。 4.偶联法测定酶的活性 举例： 葡萄糖+ATP 葡萄糖-6-磷酸+ADP 这个反应中没有明显的光谱性质的变化，无法对于酶活进行测定。但是，葡萄糖-6-磷酸+ADP是葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）