第三章 细胞.工程.pptVIP

快速无性繁殖 利用离体培养技术，将优良植株的器官、组织、细胞进行立体培养，，短期内获得大量遗传性状一致的个体 无性快繁步骤： 无菌母株获得 不定芽增殖 完整植株形成 再生植株训化 再生植株鉴定 试管苗大规模培养 培育脱毒作物 微茎尖培养 珠心组织培养 热处理 悬浮培养 将细胞或小块愈伤组织在无菌培养液中进行体外生长、发育 能产生大量均一细胞，增殖速度快 植物组织培养大量生产紫草素 现在已有胡萝卜、芹菜、柑橘、咖啡、棉花、玉米、水稻、橡胶等几十种植物的人工种子试种成功，但由于成本较高，中国尚未应用于生产。 紫草 紫草素 愈伤组织 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞融合方法 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 诱导方法 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（PEG） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 请问：动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？如果理论上可行，请设计出具体实验方案。 眼虫（含叶绿体） 三、微生物细胞工程及应用 应用微生物细胞进行细胞水平的研究和生产 包括微生物细胞的培养、遗传性状的改变、微生物细胞的直接利用、微生物代谢产物的获取 微生物细胞融合 早在1958年，冈田善雄发现，用紫外线灭活的仙台病毒可以诱发艾氏腹水瘤细胞融合产生多核体。 1976年巨大芽抱杆菌、枯草杆菌、裂殖酵母等原生质体融合取得成功，构巢曲霉和烟曲霉、娄地青霉和产黄青霉等真菌种间原生质体融合也获得成功。 微生物细胞融合工艺 菌种选择 扩大培养 大量菌体细胞 ①高渗溶液 (SMM液、DP液) ②脱壁酶 (蜗牛酶、溶菌酶) 原生质体 融合剂(PEG) 原生质体融合 去融合剂 融合原生质体 培养基 细胞壁再生 菌落繁殖 融合体筛选 影响微生物细胞融合的因素 一、菌株的遗传性状 需要有选择标记，标记主要通过诱变获得 需先测定各个标记的自发回复突变率，若回复突变率过高，则不宜作为选择标记 二、制备原生质体的菌龄 对数期细胞的细胞壁中肽聚糖的含量最低，对溶菌酶也最敏感。 三、细胞的前处理 细胞壁结构的差异 细菌 G+ 溶菌酶去壁 G- EDTA+溶菌酶、 EDTA+溶菌酶+Gly 真菌 蜗牛酶，是多酶体系，含纤维素酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、几丁质酶、α-淀粉酶、酯酶 生产蛋白质药物 白介素、干扰素、胰岛素 生产限制性内切酶 生防菌 哈茨木霉菌T-22株系 生物肥料 固氮菌 植物激素 赤霉素 环境治理 二噁英、海洋浮油 含糖废液的利用 酵母 木质纤维的利用 白腐真菌 采矿 氧化亚铁硫杆菌 微生物细胞工程的应用 四、细胞工程在食品工业上的应用 动物细胞工程 植物细胞工程 微生物细胞工程 四、细胞工程在食品工业上的应用 动物细胞工程 培育食用肉、动物育种、单克隆抗体 植物细胞工程 食品添加剂：甜味剂、鲜味剂、防腐剂、色素 香料：香草素、可可香素、菠萝风味剂 抗氧化剂：α-生育酚 天然食品：食用琼脂 植物药：人参皂苷、迷迭香酸、小檗碱 微生物细胞工程 酵母菌的育种 酿酒酵母+克鲁维酵母，生产啤酒 氨基酸生产菌育种 谷氨酸生产菌 酶制剂生产菌 芽孢杆菌 谷氨酸棒杆菌 酵母 芽孢杆菌 * * * 预想一下，克隆人技术路线？ 三、植物细胞工程 在离体条件下，利用人工培养基对植物器官、组织、原生质体等进行离体培养，使其按照人们的设计，定向长成完整的植株，已达到改良品种或创造新物种，或获得有用物质的过程 植物细胞工程的核心：利用细胞全能性，人为定向调控细胞生长 细胞全能性：一个活细胞具有发育成一个完整个体的潜能 1902年，G. Haberlandt首次提出 1958年，Steward 将胡萝卜韧皮细胞 培养出植株 植物细胞培养 培养基 环境 技术 培养基 无机营养成分： 大量元素 N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素 Fe、B、Mn、Cu、Mo、Zn、Co 有机营养成分： 含N物质：包括维生素和氨基酸 碳源：2-5%的蔗糖溶液，调节渗透压 维生素：VB1、VB6、烟酸、也算、泛酸、生物素 激素：生长素，细胞分裂素和赤霉素 天然有机添加物：椰汁、番茄汁等，促进细胞和组织增殖分化 琼脂 起支持作用 培养基种类 MS培养基 无机盐浓度较高，使用广泛 B5培养基 铵浓度低，适合双子叶尤其是木本植物 White培养基 无机盐浓度低，适于生根 N6培养基 成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高 Nitsch培养基 在MS培养基基础上改进 培养基的配制 先配成母液，使用时稀释 注意防止产生沉淀 铁盐