铜皮石斛无菌播种培养基优化.docVIP

铜皮石斛无菌播种培养基的优化 作 者 胡 阳 指导教师 张传海 摘要：本实验设计选用MS和1/2 MS两种基本培养基，0、0.1 mg/L两个水平的NAA和0、0.2、0.4 mg/L 三个水平的6-BA进行正交组合，进行铜皮石斛播种培养基的筛选。综合比较各组培养基上的种子萌发率、生长势以及苗分化情况，得出铜皮石斛播种的适宜培养基配方为：MS + NAA 0.1 mg/L；或MS基本培养基不加激素。 关键词：铜皮石斛，种子萌发，培养基，优化 Optimization of seed germination medium of Dendrobium moniliforme Abstract: The experimental used MS and 1 / 2 MS as basic medium, 0,0.1mg / L two levels of NAA and 0,0.2,0.4mg / L 6-BA three level orthogonal combination of Copper Dendrobium planting medium skin screening. Comprehensive comparison of each group of seed germination medium, seedling growth and differentiation potential, drawn copper Dendrobium suitable planting medium for: MS + NAA 0.1 mg / L; or MS basal medium without hormone. Key words: Dendrobium moniliforme，seed germination，medium，optimization 铜皮石斛（Dendrobium moniliforme）又名细茎石斛，是兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium）多年生草本植物，在我国分布广泛，是一种优质的药用石斛品种。其主要的有效成分生物碱的含量与铁皮石斛中的生物碱含量近似，而且含有较高的多糖、微量元素等活性物质[1]，经研究表明铜皮石斛多糖有降血糖的活性作用[2]。在传统药材市场上，常以铜皮石斛作为霍山石斛和铁皮石斛的替代品。 石斛属植物的繁殖方法有分株繁殖、分离萌孽子株、扦插等,但这些繁殖方法速度慢、增殖率低。石斛种子的胚是一团未分化的胚细胞，没有子叶和胚乳,没有营养物质,种子寿命很短,发芽率很低,成苗更难,自然条件下，与真菌共生萌发，发芽率一般不及5%[3-5]，在没有共生菌的条件下直接播入土中不能成活。通常以分株繁殖, 繁殖系数极低,远远不能满足商品化生产的要求。随着生物工程技术的迅速发展,利用植物组织培养实现快速繁殖解决了铁皮石斛的大量快速繁殖问题。 自1960年法国人Gmorel利用石斛茎尖组织培养无病毒植株的繁殖技术创立以来,石斛组织培养逐步走向成熟化。我国石斛组织培养起步较晚,直到1984年徐云鹃等[6]才首次报道获得霍山石斛试管苗。石斛组织培养再生植株与很多因素有关,如外植体的种类、培养基类型、植物生长物质种类与含量、培养条件等[7-10]。 本试验以野生铜皮石斛种子为实验材料, 探究利用MS基本培养基进行无菌播种中,离子浓度、激素配比对种子萌发和增殖的影响, 对野生石斛资源的保护和合理开发利用具有重要的意义，也为大规模工厂化生产提供初步依据。 1 材料与方法 1.1 实验材料 未裂开的成熟野生铜皮石斛果实。 1.2 主要试剂 高压 1.4 试验方法 1.4.1 培养基的配方 本试验初步研究培养基不同离子浓度和不同激素水平对铜皮石斛种子萌发和分化的影响。采用MS（第I组）和1/2 MS（第II组）两个不同离子浓度水平的组别，NAA和6-BA两种激素的不同浓度水平，进行组合试验（表1）。 表1 播种培养基的分组与激素组合 组别 培养基代号 6-BA（mg/L） NAA（mg/L） MS Ⅰ- ① 0 0 Ⅰ- ② 0.2 0 Ⅰ- ③ 0.4 0 Ⅰ- ④ 0 0.1 Ⅰ- ⑤ 0.2 0.1 Ⅰ- ⑥ 0.4 0.1 1/2 MS Ⅱ- ① 0 0 Ⅱ- ② 0.2 0 Ⅱ- ③ 0.4 0 Ⅱ- ④ 0 0.1 Ⅱ- ⑤ 0.2 0.1 Ⅱ- ⑥ 0.4 0.1 1.4.2 培养基的配制 按照常规流程，分为MS和1/2 MS两大组分别配制。 调节pH值至5.8左右，分装至120 mL的塑料培养瓶，每瓶45 mL。。 培养基经湿热蒸汽灭菌后，置于无菌室备用。 1.4.3 播种培养 （）播种完成后，将培养基转