2细胞培养,及建立泡沫细胞模型.docVIP

2)实验手段 (1)细胞培养及建立泡沫细胞模型 将THP-1细胞置于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，于370C, 5} CO:培 养箱静置培养。该细胞株属人类单核细胞系，在培养液中呈簇集状悬浮生长，倍增时间 大约在26 h后。细胞浓度控制在106/mL，每两天换液一次，每四天传代一次。细胞复苏 后，传至3 }= 5代后方可用于建模。 (2)建立巨噬细胞模型 取对数生长期的细胞，分为正常组和模型组，调整细胞浓度为106/mL，接种于6孔培 养板，每孔2 mL。正常组在含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液中培养。模型组先 置于含160 nmol/L PMA的RPMI 1640基础培养液中培养72 h，贴壁后轻轻吸去上清液， PBS洗3遍，更换10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液，即得巨噬细胞。巨噬细胞的鉴 定己在发表文献中完成。 (3)建立巨噬源性泡沫细胞模型 将获得的巨噬细胞更换含3%胎牛血清的RPMI 1640培养液，并加入终浓度为80 mg/L 的Ox-LDL，共同孵育48 h，油红。染色后，镜下观察细胞内充满橘红色脂滴，即得泡沫 细胞模型，此过程即为泡沫化。 (4)针对CaSR的si RNA的构建及转染 根据公认的si RNA设计原则(Nat Biotech 2004; 22: 326-330)设计