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测定大豆蛋白粗蛋白含量的不确定度评定 　　摘要：粗蛋白是大豆分离蛋白出厂检验项目，根据凯氏定氮法测定大豆分离蛋白中粗蛋白含量，依据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与分析》计算在测定过程中的随机效应和系统效应导致的不确定度，最终评定结果的不确定度。 　　关键词：粗蛋白 不确定度 　　1 概述 　　①设备：Kjeltec2000全自动凯式定氮仪 CP225D型电子天平。 　　②环境条件：温度21℃ 湿度55%RH。 　　③被测对象：大豆蛋白。 　　④测定项目：粗蛋白含量。 　　⑤方法简述：根据GB5009.5-2010测定蛋白质含量的规定，将称好的试样放入消化管内并加入硫酸一同消化，使蛋白质分解，再用凯式定氮仪进行蒸馏，记录仪器上显示的数据即为粗蛋白含量。 　　2 建立数学模型 　　X=C（V1-V0）×0.014×6.25×100/m 　　式中：X――为粗蛋白含量% 　　C――为盐酸标准溶液的浓度mol/l 　　V1――为试样消耗盐酸溶液的体积ml 　　V0――为空白消耗盐酸溶液的体积ml 　　0.014――为与1.0ml盐酸标准溶液相当于氮的质量g 　　6.25――为蛋白质系数 　　m――为样品质量g 　　3 不确定度来源分析 　　①蛋白质含量重复性测量引起的标准不确定度，用相对不确定度Ur1表示； 　　②实验环境温度引起的相对不确定度Ur2； 　　③电子天平（十万分之一）仪器型号CP225D引起的相对不确定度Ur3； 　　④全自动凯式定氮仪引起的相对不确定度Ur4； 　　⑤空白试验消耗盐酸溶液引起的相对不确定度Ur5； 　　⑥盐酸标准溶液浓度引起的相对不确定度Ur6。 　　4 不确定度分量的计算 　　4.1 Ur1的计算 　　为获得重复性的不确定度，取测试样品进行独立重复测试6次，测量结果见表1 　　表1 重复性测量的不确定度测量结果 　　■ 　　S=■=3.877×10-4 　　Ur1=3.877×10-4/85.5501%=4.532×10-4 　　4.2 Ur2的计算 　　检测蛋白含量时实验室环境温度为21度，由此，相对不确定度为： 　　ur2=2.1×10-4×1/■=1.212×10-4 　　4.3 Ur3的计算 　　电子天平，e=0.0001g，按矩形分布则由天平引起的不确定度为： 　　0.0001/■=5.774×10-5 　　其相对不确定度Ur3=5.774×10-5/0.1484=3.962×10-4 　　4.4 Ur4的计算 　　全自动定氮仪说明书中给出的回收率为99.5%-100.5%，即测定过程中由仪器误差所导致的相对不确定度 　　Ur4=0.5%/■=2.8868×10-3 　　4.5 Ur5的计算 　　在实验滴定过程，是由全自动凯氏定氮仪来完成测定的，空白所引起的不确定度Ur5=0.5%/■=2.8868×10-3 　　4.6 Ur6的计算 　　4.6.1 标定过程及测定方法等引起的不确定度uAr（x） 　　依据GB/T601-2002《化学试剂标准滴定溶液的制备》的测定方法，标定标准盐酸溶液的浓度，标定结果见表2。 　　表2 盐酸标准滴定溶液浓度的标定结果 　　■ 　　注：空白消耗盐酸的体积为0.1ml。 　　相对不确定度uAr（x）=uA（x）/0.1003 　　=5.669467×10-6/0.1003 　　=5.653×10-5 　　4.6.2 基准无水碳酸钠的纯度 　　基准试剂无水碳酸钠的纯度为1.0000±0.0005，视为矩形分布， 　　up=0.0005/■=2.8868×10-4 　　upr=up/p=2.8868×10-4 　　4.6.3 天平称量所引入的相对标准不确定度umr同上述ur2的计算方法，即： 　　0.0001/■=5.774×10-5 　　其相对不确定度ur3=5.774×10-5/0.19506=3.030×10-4 　　4.6.4 标定体积的相对不确定度uvr 　　①环境温度：实验环境近似20℃，标准溶液的温度补正值非常小，对实验结果的影响可忽略不计。 　　②滴定管的校准：滴定时使用50毫升酸式滴定管，按照检定规程，其最大允许误差为±0.05毫升，相对允许误差为±0.1%，按矩形分布，则滴定体积时相对标准不确定度u（50）=0.1%/■=5.774×10-4。 　　③滴定终点的判断：终点时误差±0.05毫升，两点分布，现由终点分布判断引入的标准不确定度uz=0.05毫升，本实验中的相对标准不确定度 　　uzr=0.05/35.95=1.391×10-3 　　则：uvr=■=1.506×10-3 　　④其它常数