选修3现代生物科技专题知识点整理要点.doc

选修3《现代生物科技专题》 第一章 基因工程 基因工程的概念 是狭义的遗传工程，其核心是构建重组的DNA分子，早期也称为重组DNA技术。 （一）基因工程的基本工具 1.限制性核酸内切酶（限制酶） (1)来源：从细菌中分离出来。 (2)作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 (3)结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2. DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶DNA聚合酶DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 3.载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是——质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 基因工程的原理：让人们感兴趣的基因（即目的基因）在宿主细胞中稳定和高效地表达 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→筛选→表达 实质 基因重组 结果 人类需要的基因产物 (二)基因工程的基本操作程序 (1)获得目的基因 有两种方法： ①目的基因的序列是已知的：用化学方法合成目的基因，用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因 ②目的基因的序列是未知的：从基因文库中提取目的基因。 (2)形成重组DNA分子 用一定的限制性核酸内切酶切割质粒，使其出现一个切口，露出粘性末端。用相同的限制性核酸内切酶切割目的基因，使其产生相同的粘性末端。将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成一个重组DNA分子(重组质粒)。 (3)将重组DNA分子导入受体细胞 基因工程中常用的受体细胞有：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞。 导入过程：用氯化钙处理大肠杆菌，增加大肠杆菌细胞壁的通透性，使重组质粒进入大肠杆菌受体细胞 ? 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用 方法 农杆菌转化法(主要) 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 病毒感染法 Ca2＋处理细胞法 受体 细胞 受精卵或体细胞 受精卵 微生物细胞 转化 过程 构建重组质粒→农杆菌→导入植物细胞→整合到植物细胞的DNA上→表达 构建重组质粒→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组质粒与感受态细胞混合→重组质粒进入感受态细胞 (4)筛选含有目的基因的受体细胞 根据重组质粒上的抗生素抗性基因的抗性或荧光物质筛选出含有目的基因的受体细胞。 筛选含有目的基因的受体细胞的主要方法有： 筛选的依据是重组质粒上的标记基因。即根据重组质粒上的抗性基因，在培养基中加入相应的抗生素，具有抗性的受体细胞能正常生长，说明已成功导入了目的基因。未导入重组质粒的细胞因无抗性而不能正常生长(死亡)。 也可以根据重组质粒上的荧光基因所表达的荧光物质来确定重组质粒是否成功导入受体细胞。 (5)目的基因的表达 目的基因在宿主细胞中表达，产生人们需要的物质。 （三）基因工程的应用 1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 (1)运用基因工程培育动植物新品种最突出的优点是： ①能克服远缘杂交不亲和的障碍； ②育种时间短。 (2)基因工程在植物育种方面的应用主要表现在： ①培育高产、优质的农作物新品种； ②培育有各种抗性的农作物新品种。 (3)成果：抗植物病毒的转基因烟草、番茄、苜蓿和马铃薯，抗虫棉，耐贮存的转基因番茄，抗逆性强的转基因农作物等。 2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 3.基因治疗：向目标细胞中引入正常功能的基因，以纠正或补偿基