选修三1、2节要点.ppt

剪切 拼接 导入 表达 （一）获得目的基因 （二）形成重组DNA分子 （三）将重组DNA分子导入受体细胞 (四)筛选含有目的基因的受体细胞 (五)目的基因的表达 四、基因工程的基本操作步骤 步骤一 获得目的基因 人工合成 利用PCR技术扩增 已知序列： 从基因文库获得 未知序列： ( DNA library ) 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 化学合成 基因工程的基本操作程序 1、获得目的基因 2、形成重组DNA分子 3、将重组DNA分子导入受体细胞 4、筛选含有目的基因的受体细胞 5、目的基因的表达 剪切 拼接 导入 筛选 表达 　　目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 一、提取目的基因—— 将需要的基因从供体生物　的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 目的基因的序列未知 1、从基因文库中获取 目的基因的序列已知 2、利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增 3、人工合成 获取目的基因的常用方法： 1、基因文库的构建——直接分离法（或鸟枪法） 该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 2、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 PCR扩增仪 氢键断裂，形成单链DNA。 引物与DNA模板结合，形成局部双链。 在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。 多次循环，获得大量双链DNA分子。 PCR技术扩增 目的基因的mRNA 逆转录 单链DNA 合成 双链DNA（目的基因） 蛋白质氨基酸序列 推测 mRNA的核苷酸序列 推测 结构基因的核苷酸序列 化学合成 目的基因 人工合成法 逆转录法 根据已知氨基酸序列直接合成DNA 二、形成重组DNA分子 —— 核心 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 目的基因与质粒的连接 三、将重组DNA分子导入受体细胞 （1）常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 探究：转基因过程中，怎样选择受体细胞？ 转基因植物—— 转基因动物—— 转基因微生物—— 植物体细胞或受精卵 受精卵 大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌等 探究：为什么常用微生物作为受体细胞？ 目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。 微生物可通过发酵大量繁殖。 （2）将目的基因导入微生物细胞 受体细胞： 细菌 氯化钙 细胞壁的通透性增大 重组质粒进入受体细胞 目的基因随受体细胞的繁殖而复制 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 1.将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（最多、最有效） 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理，以增加细菌细胞壁的通透性。 探究：如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 1）原理： 2）方法： 3）举例 所有受体细胞 接种 含有四环素的培养基 筛选 生活的受体细胞 导入 重组DNA分子 （抗四环素基因） 培养 含重组DNA分子的受体细胞 四、筛选有目的基因的受体细胞 质粒上有抗生素的抗性基因 利用选择培养基筛选 筛选含有目的基因的受体细胞 　　前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 　　多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 受体细胞摄入DNA分子后就