动物细胞生长缓慢.ppt

第九章 动物组织培养 第一节、动物组织培养的基础一、动物细胞 特点； 无细胞壁倍增时间长，生长缓慢需氧量少，对搅拌敏感聚集体形成原代细胞培养50代即开始退化 二、 动物细胞培养定义动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。是动物细胞工程的基础。 Classification of Cell CulturesPrimary CultureCells taken directly from a tissue to a dishSecondary CultureCells taken from a primary culture and passed or divided in vitro.These cells have a limited number of divisions or passages. After the limit, they will undergo apoptosis.Apoptosis is programmed cell death Primary Culture 细胞系：原代细胞经第一次传代后，形成的细胞群体，即具有增殖能力，类型均匀的培养细胞，一般为有限细胞系。细胞株：细胞系经过克隆或其他方法而得的单一类型的细胞群体。原代培养后得到细胞系，再经多次传代培养后，一部分细胞死亡，一部分细胞继续生长并转化为连续细胞系或无限细胞系。 3、生长特性根据形态特征分类贴壁型（粘附型细胞） 上皮细胞型、 成纤维细胞型、 游走细胞型、 多形细胞形。 粘附生长本是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式。粘附有两种含义：一是细胞之间相互接触；二是细胞与细胞外基质结合。 动物细胞培养中，大多数哺乳动物细胞是必须附壁即附着在固体表面生长，当细胞布满表面后即停止生长，这时若取走一片细胞，存留在表面上的细胞就会沿着表面生长而重新布满创面。  两种贴壁的培养细胞 Contact nhibitionWhen cells contact each other, they cease their growth.Cells arrest in G0 phase of the cell cycleTransformed cells will continue to proliferate and pile upon each other 悬浮型体外生长不必贴壁，可在培养液中悬浮生长，因此也叫悬浮型细胞。一些在体内原本就以悬浮状态生长的细胞或微生物，当接种于体外环境中也可以以悬浮状态生长。血液白细胞、淋巴组织细胞，某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等都属此类细胞。这类细胞形态学特点是胞体始终为球形。 第二节、常用的细胞培养方法一、培养细胞的生存环境1.环境无毒和无菌；2.适宜的温度；人和哺乳动物培养细胞最适温度均为35－37℃。3.气体环境和氢离子浓度；需要一定量的O2（1995－9975pa）和CO2（95％空气+5%CO2）；pH7.2-7.44.渗透压；260－320mOsm/kg适用于大多数细胞5.营养物质；六碳糖是主要的能源物质，还需要12种基本氨基酸和谷胺酰胺等 二、动物细胞培养的特殊性1、大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体的表面才能生长。 2、动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需要血清。  3、对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感，包括 pH 、溶解氧、温度、剪切力等都比微生物有更高的要求，一般需严格监控。 4、动物细胞生长缓慢，因此培养时间较长。 对环境的影响又比微生物为大，因此常用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。  三、Medium liquid in which cell are grown contains physiologic (pH, osmolarity) supraphysiologic (hormones, nutrients) nonphysiologic (dyes, antibiotics) Medium Medium Medium Dissolved gases to control pH together with NaHCO3 H2O + CO2 ? H2CO3 ? H+ + HCO3- Handerson-Hasselbach eqn predicts pH: pH = 6.0966+log([HCO3- ]/[CO2 ]) Medium D