RNA录与转录后加工.docVIP

第7章 RNA转录与转录后加工 1 本章主要内容　 转录的基本概念 大肠杆菌RNA聚合酶及其转录 真核生物的RNA聚合酶及其转录 RNA的转录后加工和反转录 2 教学目的和要求 通过本章学习，掌握转录的基本概念，原核转录的主要参与者（RNA聚合酶和启动子）以及原核转录的过程（起始、延伸和终止）。 掌握真核转录的三种主要RNA聚合酶、所转录的基因类型和参与转录过程各种因子等。 了解不同前体RNA的加工机制。 了解反转录的特点 3 重点难点 1) 转录 2) 大肠杆菌RNA聚合酶、原核转录的过程 3) 真核生物的RNA聚合酶、真核转录过程、转录因子 4) RNA的转录后加工、反转录 4 教学方法与手段 讲授与交流互动相结合，采用多媒体教学。 5 授课内容 1) RNA转录概述 2) 细菌基因的转录 3) 真核生物的转录 4) RNA的转录后加工 5) RNA的反转录 第一节 RNA转录概述 一、 信使的发现 1955年Brachet用洋葱根尖和变形虫进行实验： 若加入RNA酶，则蛋白质合成就停止； 若再加入来自酵母的RNA，又可合成蛋白质。 这表明什么？ 同年Goldstein和Plaut用同位素标记变形虫RNA前体—— 发现标记的RNA在核内。 标记追踪实验：经过一段时间又发现被标记的RNA在细胞质中， 这表明什么？ 1956年E. Volkin和 L.Astrachan： 用同位素脉冲一追踪标记 表明T2噬菌体新合成的RNA的碱基比和自身的DNA碱基比相似，而和细菌的碱基比不同。T2感染细菌时注入的是DNA，而在细胞里合成的是RNA。 这表明什么？ 最令人信服的证据是Hall.B.D和Spiegeman,S的DNA-RNA的杂交实验： 将T2噬菌体感染E.coli后产生的RNA分离出来，分别与T2和E.coli的DNA进行分子杂交。 结果这种RNA只能和T2的DNA形“杂种”链，而不能和E.coli的DNA进行杂交。 Jacob和Monod预言: （1）这种“ 信使”应是一个多核苷酸； （2）其分子平均不小于5(105bp,足以携带一个基因的遗传信息； （3）它们至少是暂时连在核糖体上； （4）其碱基组成反映了DNA的序列； （5）它们能高速更新。 Jacob和Monod将它定名为: 信使RNA (Messenger RNA) 或mRNA。 二、 几个基本概念 转录(transcription):是指以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA聚和酶催化下，以4种rNTP（ATP、CTP、GTP和UTP）为原料，合成RNA的过程。 在有些病毒中，RNA也可以指导合成RNA。 转录是基因表达的第一步，也是最关键的一步。 三、 RNA合成的基本特点 1960年Weiss,S,B等发现RNA聚合酶(RNA Pol)。其特点是： （1）以核糖核苷三磷酸（rNTR）为底物； （2）以DNA为模板； （3）按5′-3′方向合成； （4）无需引物的存在能单独起始链的合成； （5）第一个引入的rNTP是以三磷酸形式存在； （6）在体内DNA双链中仅一条链作为模板； （7）RNA的序列和模板是互补的。 确定有义链 1963 J.Marmur和Doty Spiegelnan区分有义链。采用枯草杆菌的SP8噬菌体为材料，SP8 DNA 双链有“ 轻”、“ 重”差异明显。 现在将作为转录模板的DNA单链称为模板链或反义链（antisen strand）， 非模板链称为有义链（sense strand）或编码链。 在体外DNA的两条链都可作为RNA合成的模板。 怎样用实验证实mRNA的合成总是延着5’- 3′方向进行的？ E.coli在 0(C时需13秒钟才能加上一个核苷酸，但在37(C每秒就可加上40个核苷酸; 利用这个差别以14C来标记U, 在0(C培养E.coli，。 提取这种正在伸长的mRNA分子,发现—— 14C标记首先出现在伸长的3′端，因此可以证明合成是延着5′-3′方向进行的。 四、 RNA合成和DNA复制的区别 (1) 转录时只有一条DNA链为模板，而复制时两条链都可作为模板； (2) DNA-RNA杂合双链不稳定，RNA合成后释放，而DNA复制叉形成后一直打开，新链和母成子链； (3) RNA合成不需引物,而DNA复制需引物； (4) 转录的底物是rNTP，复制的底物是dNTP； (5) 聚合酶系不同。 第二节 细菌基因的转录 一、 细菌的RNA聚合酶 1. 全酶 (Holo Enzyme)和核心酶(Core Enzyme) (1) 全酶（Holo Enzyme） 用于转录的 依靠空间结构与DNA模板结合 (σ与核心酶结合后引起的构象变化