【2017年整理】体内药物分析实验.docVIP

HPLC法测定大鼠血浆中的山奈酚 目的要求 掌握血浆样品的前处理方法。 熟悉方法回收率和萃取回收率实验操作和评价。 熟悉大鼠眼眶采血技术；熟悉方法学研究中其他评价内容。 1.2 主要实验材料与仪器 山奈酚（Kaempferol）及其对照品，黄芩素（baicalein），抗坏血酸，肝素，β-葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase）和硫酸酯酶（sulfatase），分析纯甲醇，冰醋酸、无水乙醚，色谱纯乙腈；高效液相色谱仪，氮吹装置，恒温水浴，混合器，13000r/min台式离心机，不同规格移液枪（5, 20, 50, 100, 200, 1000μL）和容量瓶（1025mL），5~10mL具塞离心管若干；雄性SD大鼠（180~220g）。1.3 实验原理 山奈酚吸收进入体内后，多以二相代谢物葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的形式存在。由于山奈酚葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的对照品难以获得，故采用加入硫酸酯和葡醛酸苷水解酶处理样品，使代谢物水解后测定苷元山奈酚的浓度。实验以黄芩素为内标，HPLC法测定血浆中山奈酚浓度，对建立的方法进行方法学评价。 1.4 实验方法 1.色谱条件：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），配保护柱，柱温40℃；-0.5%冰醋酸（35:65）为流动相，流速1mL/min；检测波长370nm；进样量20μL。 2.溶液配制：取山奈酚对照品约2.5mg，精密称定，