愈伤组织[精选].ppt

草莓愈伤组织 一、愈伤组织的诱导 脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 一、愈伤组织的诱导 再分化 ：愈伤组织在一定的培养条件下又可以经过胚胎发生形成双极性的胚状体，或经过器官发生形成单极性的芽或根，进而重新形成完整的植株，这后一段过程一般称为再分化。 诱导愈伤组织极为重要的因素－植物生长调节物质  常用的生长素是——2,4－D、IAA和NAA，浓度为0.01—10mg·L-1，如诱导玉米胚愈伤组织发生的培养基为MS+2,4－D8+NAA１，很多情况下单独用2,4－D就可； 常用的细胞分裂素是——激动素和6-BA，使用的浓度范围在0.1—10mg·L-1。 两者结合应用时，能更强烈地刺激愈伤组织的形成。 （一）诱导期： 组织的机械损伤也作为一种刺激因素诱导细胞开始分裂，愈伤组织往往出现在伤口处。有些天然提取物对愈伤组织的诱导和维持十分有益，常用的有椰子汁（10％），0.5％的酵母提取物，5％～10％的番茄汁。 （一）诱导期： 离体培养的细胞在分裂前发生的变化： ①?在切离和培养后较短时间内，细胞的气体交换迅速增加，特别是在加有生长素的培养基中培养时，比无生长素的培养基中气体交换增加一倍。 ② 多聚核糖体不断增加。截止M期前，每个细胞中的RNA含量增加到300％； ③蛋白质发生周期性的积累。每个分裂细胞的总增加量约为200％； ④?酶活力也发生一定的变化。DNA复制前，DNA聚合酶活力增加；分裂前，与代谢有关的酶类，如己糖激酶和一些脱氢酶的活力也增加。 （二）分裂期 分裂期指细胞通过一分为二的方式，不断增生子细胞的过程。外植体的细胞一但经过诱导，细胞脱分化，其外层细胞开始细胞分裂。 ①?细胞的数目迅速增加。胡萝卜组织培养7d后，细胞数可增加 10倍。 ②?每个细胞平均鲜重下降。这是由于鲜重的增加赶不上细胞数目的增加之故。 （二）分裂期 ③?正在分裂的细胞体积小，内无液泡，如同根尖和茎尖的分生组织细胞一样。 ④细胞的核和核仁增大到最大。 ⑤细胞中的RNA含量减少，而DNA含量保持不变。 ⑥随着细胞不断分裂和组织生长，组织的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成极快。 处于分裂期的愈伤组织的特征是：细胞分裂快，结构疏松，缺少组织结构，颜色浅而透明。 （三）分化期 是指停止分裂的细胞发生生理代谢变化而形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织。在细胞分裂末期，细胞内开始发生一系列的形态和生理变化，导致细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞。分化期愈伤组织内的细胞主要出现下列变化。 （三）分化期  （1）细胞分裂部位和方向发生改变 分裂期的细胞分裂局限在组织的外缘，主要是平周分裂；而在分化期开始后，愈伤组织表层细胞的分裂逐渐减慢，直至停止；进而转向愈伤组织内部深处的局部地区的细胞开始分裂，使分裂面的方向改变了，出现了瘤状结构的外表和内部分化。 （三）分化期 （2）分生组织瘤状结构和维管组织形成 迅速生长的愈伤组织，都是极相似的，而当愈伤组织生长速度减慢时，就会出现特殊的形状和结构。在生长中的愈伤组织，一个共同的特征是：形成由分生组织组成的瘤状结构，变成不再进一步分化的生长中心，并在其周缘产生扩展的薄壁细胞。瘤状结构则成团分散分布在愈伤组织块中。形成了维管组织，但不形成维管系统，而呈分散的节状和短束状结构，它可由木质部组成，也可由木质部、韧皮部乃至形成层组成，细胞分裂素对促进组织维管化有重要作用。 （三）分化期 （3）细胞的体积不再减小 愈伤组织分化时外植体细胞的大小发生十分明显的变化，生长的愈伤组织的细胞平均大小不再减小，至此以后，保持相对不变。 （4）出现各种类型的细胞 如薄壁细胞、分生细胞、管胞、石细胞、纤维细胞、色素细胞、毛状细胞以及细胞丝状体等。 （5）出现一定的形态特征 生长旺盛的愈伤组织一般呈奶黄色或白色，有光泽，也有淡绿色或绿色的，老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色。 （三）分化期 不同外植体来源的愈伤组织有一定的均一性。如叶栅栏组织细胞和根细胞在大小和形态上有一定的差异，但是两者诱导形成的愈伤组织就失去了原有的差异，变得比较均一。 若诱导条件不同，愈伤组织的形态和物理性质也有一定的变化，有的紧密坚实，有的疏松脆弱。例如，在柑橘子叶培养中，在MS附加1mg/l NAA与0.2mg/l 6-BA的培养基上形成的愈伤组织紧密坚实呈瘤状，而在MS附加0.2mg/l 2,4-D与0.2mg/l 6-BA培养基上形成的愈伤组织则疏松易脆。