涂家生教授-注射剂的药学进展2014.09解读.ppt

图15为异山梨醇酐母体结构成分的核磁检测结果，对比两结果可以发现：除化学位移4附近的峰外，其余峰几乎完全一致，无明显差异。山梨醇结构相对简单，影响氢质子化学位移的因素以氧原子为主，故POS氢质子化学位移更均一；而POI不仅氧原子对氢质子有影响，更重要的是形成类似呋喃结构不含双键的杂环，杂环对母体上的氢质子化学位移亦产生较大影响，故导致POI在δ=4附近出峰复杂。 * 图16为异山梨醇酐母体结构成分的HPLC检测结果，其中保留时间约17min的峰即为异山梨醇酐。 * 该图为山梨醇母体结构成分的液相检测结果，该物质中不含异山梨醇酐成分。 * 本图所测为特制一失水山梨醇为母体结构的产品，但正如前面提到的，该成分为中间产物，很难保证其纯度，故检测结果显示，其中也含有不足1%的异山梨醇酐成分。 * 而本图是对市售产品的检测，发现，市售产品中同时含有一失水山梨醇和二失水异山梨醇酐两种成分。通过HPLC法可以明确显示各产品的母体组成及含量。在证明了各特制产品的母体纯度后，对其安全性进行了深入考察。 * 本部分对于不同母体结构的安全性评价以下三种方法：即溶血性实验、细胞毒性实验以及肥大细胞脱颗粒实验（即致敏性实验）组成。 * 由于成分检测中发现一失水山梨醇酐产品含有少量异山梨醇酐组分，故未对其进行考察。通过对山梨醇和异山梨醇酐为母体结构的成分溶血性考察后发现：这两种组分的溶血性能存在极其显著的差异。山梨醇母体结构成分在最高实验浓度下的溶血率仅为16%，而异山梨醇酐母体结构在最低浓度下溶血率以高达90%以上。这一结果符合上一部分中对低分子量物质与溶血性关系的结论。 * 基于同一理由，本实验也未考察一失水母体结构成分。而结果与溶血性实验结果一致，两种受试成分同样具有极其显著的差异。异山梨醇酐母体结构组分在两种实验浓度条件下，β-氨基己糖苷酶释放率均高达90%以上，而山梨醇为母体结构的组分在两种浓度下释放率均不足20%。综合溶血试验和致敏实验的结果可以证明：聚山梨酯80中低分子量物质中以异山梨醇酐为母体结构的成分能够导致极强的溶血和致敏。 * 为了进一步证明异山梨醇酐母体结构成分的强致敏性和强溶血性，并非由其细胞毒性导致，故进行了细胞增值考察。分别含有两种母体结构组分的培养液培养细胞24h后，观察发现均对细胞有一定的毒性，可导致细胞凋亡，且由图22可知，两种组分无明显差异。故证明异山梨醇酐组分导致溶血和致敏由其他机理引发而非单纯的细胞凋亡。 * 在对不同母体结构成分的安全性进行了评价后，进一步对其功能性进行考察，包括增溶能力比较，最大载药量比较以及临界角束浓度等关键质量参数的考察。以证明更安全的成分是否能够单独使用。 * 采用核磁法检测不同成分的载药能力。若药物被包裹于胶束内部，则应无药物特征峰出现。以多西他赛为模型药物进行考察。图23为多西他赛的核磁图谱。 * 图24为山梨醇母体结构成分与多西他赛形成胶束后的检测结果。由图谱可知，多西他赛基本被包裹于胶束内部，多西他赛的特征峰基本被隐藏。说明山梨醇母体成分具有良好的增溶能力。 * 图25为异山梨醇酐组分与多西他赛形成的胶束复合物检测结果。多西他赛特征峰也基本被隐藏，说明该母体结构成分同样具有一定的增溶能力。 * 如表1所示：在5:1、15:1和25:1三种不同比例的胶束复合物中，山梨醇母体结构成分的载药量均高于异山梨醇酐母体结构成分。因此说明前者的载药能力强于后者。而根据两者的结构基础进行分析发现：由于异山梨醇酐母体结构仅存在两个羟基，故更容易与油酸形成双酯结构。而一旦其形成双酯，则不再具有极性头部和非极性尾部的结构，形成胶束的能力降低，从而使载药量降低。 * 以芘为荧光探针，荧光分光光度法检测后发现：山梨醇母体结构成分的CMC值与市售产品的相关参数无明显差别。约为0.462×10-5mol/L。 * 本部分内容针对之前提出的“母体结构假设”进行了深入考察。实验发现：未失水与二失水母体结构在致敏性和溶血性方面存在极其显著的差异，而且导致过敏和溶血的机制并非单纯由细胞凋亡引起。同时，未失水山梨醇为母体结构的成分在相关功能性关键参数方面较异山梨醇酐更好。具有良好的增溶特性与更高的最大载药量，且临界胶束浓度与市售产品相似，建议：供注射用药品中，使用的聚山梨酯80应采用以山梨醇为母体结构的成分。可降低制剂的不良反应。与此同时，值得注意的是：异山梨醇酐为母体结构的组分符合目前USP34中对于聚山梨酯80的定义，但由于其具有强致敏性和强溶血性，故我们需要对聚山梨酯80的质量标准进行更为严格的控制。 * 上述总结以图表直观显示。 * 第三部分则对聚山梨酯80的潜在致敏机制进行了初步的探讨。对渗透压差异和与蛋白质络合产生异常胶束行为两种机理进行考察。结果分别如下. * 本检测中所涉及的六种供试品包括：1失水山梨醇