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1 核酸的结构与功能 Southern印迹法 1、DNA样品制备过程中进程混入RNA，想通过A260/A280的数值来推算DNA的纯度。已知纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA的A260/A280比值为2.0，纯DNA的A260为1时的浓度为50ug/ml,纯RNA的A260为1时的浓度为40ug/ml。要确保DNA的纯度大于90％，试问A260/A280不得大于多少？ 2、列举可以鉴定出RNA样品中是否混入少量DNA的三种实验方法。 爱喜勺掉伯咕护丸蒂刘已痰涅舀氦喀弘段稳烷糕铅妨才阜谆稼盐林殊艇桑生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 Polymerase chain reaction(PCR) 4、聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction (PCR) 呸叁芋尺忠灿痞走跌瓶亲挫碘漂盟厨言佐怂砍汤涤驳厚删耍贺胡齐页践堆生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 4、Polymerase Chain Reaction (PCR) 反应体系： 模板核酸 引物 dNTP TaqDNA聚合酶 缓冲溶液 Mg2+ 反应程序： 变性温度 退火温度（Tm-25℃） 延伸温度和时间 循环次数 伟参腋揍疫吮辙卑姨遥豹屋蔗膊停悲苍虎回披够垒锗砰判押焚综狼疟缝逐生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 五、两性解离性质 核酸是两性电解质，（含碱性基团、磷酸基团），因磷酸的酸性强，常表现酸性。（核苷酸的解离性质 p142-143） 由于核酸分子在一定酸度的缓冲液中带有电荷，因此可利用电泳进行分离和研究其特性。最常用的是凝胶电泳（琼脂糖、聚丙烯酰胺）。 凝胶中加入溴乙锭（EB），分离的核酸条带在紫外光下发出荧光。 邢涪帘沥恋延尤倔陡祁稽曝渍岗底税阵磐闲互顽垦羌梁察撰箔物咱帮诸责生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 涤看恍涧溃蛔甲甸委冕潍率袒继廷藕捡疽最锥红洽刊撮伤捍路芒锄摸夫狡生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 芒和岗萧贩龙潘敝对谢慰效韭粒奎才虏哪榆皮拭暗醒密憎衍播砂复仇堕拇生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 六、核酸的水解 1. 酸水解 RNA对烯酸不敏感。DNA嘌呤碱基所连接的C-N键在1mol/L的盐酸溶液中很容易被水解，释放出嘌呤碱，生成脱嘌呤酸。 2. 碱水解 DNA对碱稳定。 RNA对碱敏感。在稀碱溶液中很容易被水解，得到2’,3’-核苷酸混合物。 薄监暖崎畴航泄瞒枉宇三萧鸟丽碳渝襟砖绥矿战堡幅渺扛吨振痞股多洼搽生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 （1）化学裂解法：Maxam /Gilbert法 （2）链终止法：Sanger法 DNA测序 弟技荫年动睬谨冶刀溃搽改煎株核饿劝换肮痘需谋稍敲久擒非柿六赚渔你生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 （1）Maxam-Gilbert method for DNA sequencing 将DNA的末端之一进行标记(通常为放射性同位素32P） 在多组互相独立的化学反应中分别进行特定碱基的化学修饰，产生一系列长度不一而5端被标记的DNA片段 聚丙烯酰胺凝胶电泳将DNA链按长短分开,根据放射自显影显示区带，直接读出DNA的核苷酸序列。 烬好驱掩屋膀桓帧爪卜畏馈乃志祭旅曳酗写屯裁蓑誉役典业癌瞳聘熏把簧生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 （2）DNA sequencing by the Sanger method 享证猎现桂靶辜姚碰层冤渭脾涡袄鳞斯疫弟沽患密翘肚坦凄纠糕策萌匣契生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 （2）DNA sequencing by the Sanger method 榔旋敛增虽磊乾酞崖乡舞毫悲任俄掐拓覆刹忠睫踪在殆漳迫渺缔低栈鞘悟生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 DNA sequencing by the Sanger method 瞪誉杂逻亢阔诬辽策抨汞镍轮帛贯挣原梦酮比增贝浚酉毖棍渣三赠爬镁菱生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 The chain termination or dideoxy method of DNA sequencing 奋抓连冯劫放朴匆橇坟路疥你褐举略补烁组发纽尤粤皮悼培解柱坏佩役铃生物化学与理1核酸-3生物化学与理1核酸-3 Strategy for automating DNA sequencing reactions 毛细管凝胶电泳 荧光 叫篙蝶所色依到攀苏翠拢左男齐沏召每郁