磁珠法-真假羊肉鉴定幻灯片.ppt

量程的调节方法 zjd6650@ / 移液枪的使用 吸取液体 释放液体 1档 2档 zjd6650@ / 1、裂解细胞 每小组领取称好的肉制品（ A 、B、C或D ），用镊子将肉放在研钵中稍加研磨 加入10μl 蛋白酶K继续研磨至匀浆状，加入200μl裂解液 用移液枪转移到2.0ml EP管中1中，振荡至彻底混匀 将小指管标号为1、2、3、4、5 将EP管1置于56oC恒温水浴锅中保温约15分钟 在研钵的一角进行充分研磨 zjd6650@ / 保温同时，讲解下面内容： 思考： （1）恒温水浴锅的温度若过高或较低，对裂解细胞可能有什么影响？ （2）温育后，小指管中可能会有哪些物质？ 蛋白质、脂肪、糖类、DNA、无机盐等 zjd6650@ / 盒子里既有铁钉，又有许多铜钉和木钉，你怎么把铁钉挑出来？ zjd6650@ / 磁珠 生物活性基团 磁珠可特异性地结合DNA zjd6650@ / 2、磁珠结合 注意：磁珠结合液使用前必须上下颠倒、充分混匀，否则可能使提取的DNA量下降。 1号 混匀的磁珠结合液250μl 颠倒混匀5分钟 DNA、蛋白质、脂质、糖类等的混合物 zjd6650@ / 裂解 洗Ⅰ 500μl 洗涤液Ⅰ 磁珠与DNA结合 3、洗涤 洗Ⅱ 500μl 洗涤液Ⅱ 将磁珠吸附于磁力笔上，于空气中静置1 min 加磁场，吸起磁珠；撤去磁场，晃动使磁珠转移到EP管2；颠倒混匀 加磁场，吸起磁珠；撤去磁场，晃动使磁珠转移到EP管3；颠倒混匀 注意：用磁力笔转移磁珠时，尽量把磁珠吸干净，以减少DNA的损失。 zjd6650@ / zjd6650@ / * 近两年，假羊肉事件备受人们关注，今年4月，安徽大学的学生薛纯花了3天时间，只用了30多块钱，对合肥的66个摊点的羊肉串进行了肉类成分检测，结果只有两成合格。 比如羊肉串，可能只是用鸭肉、鸡肉或猪肉等泡过羊油、加入色素等后的假羊肉；再比如挂着羊头，卖的却是老鼠肉。对消费者来说，这些假羊肉危害就比较大了，因为有的肉加入了对人体有害的色素，有的肉可能是病死肉，含有病菌等。 * 我们怎样辨认哪个是真的羊肉呢？ * 副板书 * 提前将研钵置于零下20度预冷。 问：怎么把EP管中的DNA提取出来呢？ 磁珠的介绍 * 思考：颠倒混匀的目的是什么？ 异丙醇的作用：聚沉DNA * 简单介绍各种成分的作用。 图片：细绳 教育部教学仪器研究所 洛阳惠尔纳米科技有限公司 zjd6650@ / 电泳加样演示 zjd6650@ / 学生电泳混合样品 zjd6650@ / 学生观察电泳过程 zjd6650@ / 学生观察电泳结果 zjd6650@ / 电泳结果 zjd6650@ / 我们的合影 zjd6650@ / “假羊肉”事件 zjd6650@ / 哪个是真的羊肉呢？ 有更科学和说服力的检测方法鉴别真假羊肉吗？ zjd6650@ / zjd6650@ / 动物细胞模式图 细胞核 基因存在于哪里？ zjd6650@ / 染色体由DNA和蛋白质组成 DNA链总长约1m zjd6650@ / 基因:DNA分子上有特定遗传信息的片段 基因 基因 基因 zjd6650@ / 资料1：遗传物质DNA是由4种脱氧核苷酸相连构成的长链。不同生物的DNA，脱氧核苷酸排列顺序不完全相同，这决定了生物性状的千差万别。亲缘关系越近的生物，脱氧核苷酸排序顺序的差异越小。如2002年的一项研究表明，人与黑猩猩两种生物在脱氧核苷酸排列上仅存在1.23%的差异。 经研究，羊、鸡、猪、鸭、鼠等动物细胞色素b基因（大小为307bp）序列存在差异（约5.9%-32.9%），以此可区分羊与其他种类的动物。研究已测得羊细胞色素b的基因序列，可以认为它是一段羊特异的DNA片段。 zjd6650@ / 实验设想： 通过鉴定某肉制品中是否有羊特异的细胞色素b基因（或DNA片段），确定是否为羊肉。 zjd6650@ / 第一步：破碎细胞，提取DNA DNA提取试剂盒 zjd6650@ / DNA提取完成，怎么分离得到大量羊的特异DNA片段呢？ 阅读资料2，小组讨论。 1993年，美国科学家Dr.?Mullis因发明PCR（聚合酶链式反应）技术获得诺贝尔化学奖。这是一种在体外特异合成DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增。PCR技术，一是要知道该DNA片段的序列，以设计特定的“引物”引发反应；二是要有模板DNA存在，否则不能得到该DNA片段。 zjd6650@ / 第二步：扩增羊的特异的DNA片段（PCR技术）