第四次分子生物学研究方法幻灯片.pptVIP

６　巢式PCR（nested PCR） 巢式PCR是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两 轮PCR扩增反应。 在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物 在内引物的存在下进行第二轮扩增。 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个 靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的序列很少） 增加了扩增的可靠性和敏感性。若用于检测则可增加检 测的可靠性。 二　PCR的应用 PCR技术问世以后，立即引起广泛的兴趣与重视，很快在 全世界范围内得到广泛的应用和发展，迅速进入遗传性 疾病的基因诊断、传染病病原体的检测、法医学和考古 学等领域 研究 基因克隆，DNA测序，引入突变等 诊断、检测 细菌、病毒、寄生虫检测，诊断 　－遗传性病症的诊断、癌基因检测 法医 犯罪现场标本分析、亲子鉴定等 其他…… 2)基因检测 A’ 内源性病变基因 正常人 A 病 人 病原微生物基因 正常人 (-) 病 人 (+) 遗传病的诊断 基因缺失、插入或置换等 地中海贫血 珠蛋白链合成不平衡 A 正常人 病 人 正常 病人 PCR-RFLP法： 限制性内切酶 恶性肿瘤（癌基因或抑癌基因） Ras基因 突变 限制性内切酶 正常 突变 电泳 3)基因鉴定 女性 男性 Y引物 PCR 男性 女性 法医学分析 个体识别、亲缘鉴定 方法：PCR-RFLP