菊花的组培养.pptVIP

细胞分化 一、植物组织培养的原理 二、植物组织培养的基本过程和必要条件 相关概念： 植物组织培养的必要条件： 三、影响植物组织培养的因素 1、制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1）配制各种母液 ①无机物：大量元素浓缩10倍， 微量元素浓缩100倍， 常温保存 ②有机物：激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2）配制培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。 ① 配制培养基 ② 调PH ③ 分装 注意：由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。 琼脂融化 蔗糖 无机物、有机物的母液 蒸馏水 + + + 3）灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 1）选材：选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝 2、外植体消毒 2）消毒： ①流水冲洗 ②酒精处理 ③消毒液处理 流水冲洗 + 洗衣粉刷洗 流水冲洗20min左右 + 无菌吸水纸吸干 70%酒精中2~3次，6~7s 无菌水清洗 + + 无菌吸水纸吸干 0.1%氯化汞中1~2min 无菌水清洗至少3次 + + 3、接种 空气消毒——70％的酒精喷雾 工作台——70％的酒精擦拭 1）接种室消毒 2）无菌操作要求 ①所有接种操作都必须在酒精灯火焰旁进行。 ②每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。 3）材料的切取和接种 将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5-1cm）。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥在右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取菊花茎段，放入培养基中。插入时应注意不要倒插。每瓶接种6－8块外植体。接种后，将封口膜重新扎好。 4）接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个未接种的装有培养基的锥形瓶，与实验组一同培养，以检测培养基是否制作合格，有无被杂菌污染。 4、培养 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在18-22℃，并且每日用日光灯光照12h。 5、移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后，移栽到土壤中。 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。 6、栽培 * 细胞分裂 细胞分化 增加细胞的数目 改变细胞的形态、结构、功能 概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。 结果： 形成不同的细胞和组织 原因： 基因的选择性表达 特点： （1）持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中。 （2）稳定性：细胞分化是稳定的，遗传物质不变。 （3）不可逆性：分化了的细胞将一直保持分化后的状态，直到死亡。 思考： 已经高度分化的细胞能不能再分化形成完整个体呢？ 资料： 1958年，美国科学家斯图尔德取胡萝卜韧皮部的一些细胞，放入含有植物激素、无机盐和糖类等物质的培养液中培养，结果这些细胞旺盛地分裂和生长，形成一个细胞团块，继而分化出根、茎和叶，移栽到花盆后，长成了一株新的植株。 证明：已经高度分化的植物细胞仍然具有发育 成完整植株的能力，这就是细胞的全能性。 ——指植物的组织、器官、细胞等在离体条件下，通过无菌操作，在人工控制条件下（一定的营养物质、激素、温度等其他外界条件）进行培养以获得再生的完整植株的技术。 这种繁殖方式属于无性繁殖还是有性繁殖？ 课题1 菊花的组织培养 课题目标： 1、植物组织培养的原理 2、植物组织培养的基本过程和必要条件 3、影响植物组织培养的因素 4、具体的实验操作过程及注意事项 5、结果分析与评价 原理——植物细胞具有全能性 概念： 已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 原因： 生物体的每一个细胞都是由同一个受精卵通过有丝分裂形成的