5核酸生化全解.ppt

DNA的分离纯化 2、三氯甲烷-戊醇：将DNP溶液和等体积的三氯甲烷-戊醇（3:1）剧烈振荡，离心，上层水相为DNA、蛋白质，下层为三氯甲烷-戊醇，中间层为蛋白质凝胶，反复处理数次，直到两层之间无蛋白质胶状物； 3、去污剂法：用SDS等去污剂可使蛋白质变性 4、酶法：用广谱蛋白酶使蛋白质水解（RNA杂质） （二）RNA的分离纯化 RNA提取液中去除蛋白质的方法 1、苯酚法将组织匀浆用90%本分处理并离心。RNA即溶于上层被苯酚饱和的水层中，而DNA和变性蛋白质在下层为水饱和的苯酚中，上清液中加入乙醇，RNA即呈白色絮状沉淀析出； 2、在10% NaCl溶液中加热至90度。离心除去不溶物，加乙醇使RNA沉淀，或用等电点使RNA沉淀； 3、用盐酸胍法（终浓度2mol/L）可溶解大部分蛋白质，冷却，RNA即沉淀析出； 4、去污剂法：SDS （三）核酸的纯度检测 原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 方法：测定核算样品溶液的A260和A280，然后计算A260/A280的比值，纯的DNA样品为1.8，纯的RNA样品的 比值为2.0。 核酸样品中如有蛋白质或苯酚等杂质，比值？ （四）核酸保存：低温、避光、高度消毒，一般核酸存放在浓盐溶液中，在-80度低温冰箱冻存。 核酸含量的测定 （一）定磷法 原理：RNA和DNA中都含有磷酸，RNA的平均含磷量为9.4%，DNA的为9.9%，从样品中测