分子生物阅读延伸译文.docVIP

1.研究相互作用蛋白质组学的意义？ 蛋白质很少单独发挥其功能，通常都是多种蛋白质形成复合物起生物学作用，全球范围内蛋白质-蛋白质相互作用的研究，也就是所谓的相互作用组学已经成为非常重要的现代分子生物学。蛋白质是所有细胞的重要组成部分，大多数细胞行使功能时蛋白质之间的相互作用是必不可少的。如基因转录，细胞周期调控，信号转导或监控过程中等的基本过程都依赖于正确的功能蛋白质复合物。“后基因组”时代的重要里程碑之一是功能注释的基因组数据的积累。蛋白质形成时的干扰或对组织内蛋白质复合物的干扰，往往会导致细胞功能障碍，最终导致疾病。而且,在不同的组织和细胞中,蛋白质复合物的组成并非一成不变,为适应细胞生长的微环境变化,蛋白质复合物的各组成成分还存在着时间和空间的表达差异性。因此,在组织或细胞中众多蛋白质协同发挥生理作用的过程中,蛋白质复合物的组成分析尤其重要，这也进一步要求我们充分揭示一个细胞或组织中完整的蛋白质-蛋白质相互作用网络—蛋白质相互作用组。 2.相互作用蛋白质组学的研究方法有哪些? 答：⑴生物化学方法：①免疫共沉淀法；②亲和层析法。 ⑵ 遗传学方法：①yeast two-hybrid;②Protein-fragment complementation assay(PCA);③Membrane yeast two-hybrid(MYTH);④Resonance-energy transfer (RET) systems包括FRET、BRET、 BRET-FRET(SRET)、TR-FRET和FRAP;⑤luminescence-based mammalian interactome mapping(LUMIER);⑥The mammalian protein-protein interaction trap(MAPPIT) and its variants(Array MAPPIT、MASPIT和Reverse MAPPIT);⑦Phage display;⑧Protein microarrays 。 ①酵母双杂交②蛋白质的片段互补分析（PCA）;③膜酵母双杂交（MYTH）;④共振的能量转移（RET）系统包括FRET，BRET，BRET，荧光共振能量转移（SRET），TR-FRET和FRAP;⑤基于发光的哺乳动物相互作用组的映射（LUMIER）;⑥哺乳动物的蛋白质 - 蛋白质相互作用的陷阱（MAPPIT）及其变种（的阵列MAPPIT，MASPIT和反向MAPPIT）;⑦噬菌体显示屏;⑧蛋白质微阵列。 3.与传统蛋白质相互作用研究方法相比，相互作用蛋白质组学的优势在哪里？ 答：相互作用蛋白组学技术可以在生理条件下获得与靶蛋白相互作用的蛋白质，候选蛋白质与靶蛋白的结合机会均等；灵敏度高；鉴定出在空间上非直接物理相互作用的蛋白质，避免假阳性出现；检测多亚基蛋白质之间的相互作用；能适用于大规模蛋白质相互作用的研究等。传统方法由于其粗糙性和经济承受能力HTP互动目前可用的数据仍然是基于经典的Y2H。虽然它最近已表明，Y2H网络提供高品质的二进制交互信息，但该方法具有的固有的局限性，如收缩相互作用的核和使用酵母作为宿主系统。而现在的方法是以酵母系统为基础，应用哺乳动物系统，因此提供了一些优势，并且，他们往往是技术上的挑战，而不是扩展到HTP格式。如的PCA，RET为基础的方法或MAPPIT操作方法在哺乳动物细胞中，它可以补充耦合质谱方法（AP-MS）。这是经常选用的方法，因此HTP PPIs类药物的研究被广泛使用的亲和纯化。虽然AP-MS需要相对严格的生化隔离的蛋白质复合物，但它可以适用于宽范围的细胞类型。随着相互作用蛋白质组学的成熟可以有更多新颖的发现，也可以使我们更好的了解细胞内蛋白质之间的相互作用。 1.基因芯片在医学中有何应用？ （1）发现新基因（2）基因表达分析（3）DNA序列测定与序列间比较（4）突变体和多态性的检测（5）疾病的诊断。（6）药物研究的重要技术平台，大量应用与耐药性检测、药物靶点寻找、高通量的药物筛选、药物作用机制和毒理研究等。 2.基因芯片的使用应注意哪些问题？ ①根据研究课题的需要来选取相关基因芯片。 ②基因芯片的数量：每实验组应最少有5~6块基因芯片才具有统计学意义。 ③利用基因芯片时必须了解在什么时间取材和取什么组织进行检测的问题。在什么时间取材需要研究者根据相关文献和实验目的而定。取材时应注意不要将无关组织带入实验材料中，以免影响取材的准确性。 ④组织的取材量由组织类型和基因芯片的一次成功率决定。 ⑤不能单凭基因芯片检测结果而对不同表达的基因之间的关系做出结论。 ⑥随着蛋白芯片技术的发展，将基因芯片技术与蛋白芯片技术结合使用，可提高实验结果的可靠性和准确性。 ⑦可采用与基因芯片公司合作的方式进