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实验设计与数据处理-问题、假说和验证 Hard work and critic thinking 我们不知道哪些是我们知道的。 我们知道哪些是我们知道的。 我们不知道哪些是我们不知道的。 我们知道哪些是我们不知道的。 背景介绍 学习与记忆 突触可塑性（synaptic plasticity） 神经生理常用实验技术 1.电生理设备-检测电流或者电压的变化 膜片钳 原理：利用玻璃电极和细胞膜形成上G?高阻抗封接，选择性记录玻璃电极内的电流或者电压改变 检测指标： 离子通道电流 全细胞电流 动作电位 活体场电位记录设备 原理：利用玻璃或者金属电极记录电压的改变 检测指标： 场电位幅值或者斜率 多电极记录设备 原理：利用高阻抗金属电极记录单个细胞的动作电位 检测指标： 神经生理常用实验技术 2.分子生物学设备 凝胶电泳 原理：利用不同蛋白质分子量和电荷的不同， 检测指标：蛋白表达水平 控制基因表达技术 原理：利用病毒或者其他载体将外源目标基因转入细胞内表达 特异性敲除靶基因的表达或者条件性的敲除靶基因的表达 检测指标： PCR技术 神经生理常用实验技术 3影像学设备 光学显微镜 给特定小分子物质标定荧光物质，观测特定小分子物质的运动情况、之间的相互作用、定位和分布 电镜 在nm水平观察细胞的超微结构和免疫金标记物质的分布 MRI、PET 在活体水平观测特定脑区的活动情况 神经生理常用实验技术 4.行为学设备 学习和记忆 神经生理常用实验技术 4.行为学设备 焦虑、抑郁 一、掌握经典理论大框架 二、熟悉经典原始文献-掌握实验现象、设计和数据分析方法 T. V. P. BLISS AND T. L0MO，LONG-LASTING POTENTIATION OF SYNAPTIC TRANSMISSION IN THE DENTATE AREA OF THE ANAESTHETIZED RABBIT FOLLOWING STIMULATION OF THE PERFORANT PATH。 J. Physiol. (1973), 232, pp. 331-356。 引用超过4657次 实验设计：高频诱导15Hz，对侧作为对照。记录EPSP和PS 2.1 经典原始文献中的实验方法和数据分析 2.2多角度分析解读数据 2.3多种尺度的实验现象 三、确定实验现象的机制-根据已知推测未知可能 3.1深入研究已有理论框架 -例1，LTP和LTD诱导的频率依赖性 3.1深入研究已有理论框架 -例2 NMDAR不同亚型在突触可塑性中的作用 3.1深入研究已有理论框架 -例2 NMDAR不同亚型在突触可塑性中的作用 3.1深入研究已有理论框架-例3不同类型AMPA受体亚型 四、确定实验现象的生理意义例1。NMDA受体在学习记忆中的作用 NMDAR1 CA1-KO Pyramidal Neurons Lack Functional NMDARs in the CA1 Region Lack of LTP in CA1 and Normal LTP in Dentate Gyrus from CA1-KO Mice The Performance of CA1-KO Mice in the Water Maze 四、确定实验现象的生理意义例2。学习产生LTP IA training results in an enhancement of fEPSPs in area CA1 of the hippocampus in vivo. Learning-related enhancements in IA-trained animals are obscured in group fEPSP averages, but are revealed by analyses of the distribution of responses. Learningassociated fEPSP slope enhancements occlude subsequent LTP in the hippocampus of freelybehaving animals 经典理论的重新挖掘 Spike-timing dependent synaptic plasticity 变换配对顺序-如何做相应的对照？ Effect of repetitive stimulation with negatively correlated postsynaptic spiking on suprathreshold connections 仔细分析数据 对经典实验和理论的扩展（例1）-加入外界因素