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实验五 过氧化物酶活性的测定 ——愈创木酚比色法 一、实验目的 熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测定原理。 二、实验原理 RH2+ H2O2→2H2O + R 在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。 三、实验材料 菠菜、油菜  四、仪器用品与试剂 分光光度计，研钵，移液管，吸管。 愈创木酚，30％过氧化氢，磷酸缓冲液，反应混合液。 五、实验步骤 1、称取植物材料各0.5 g ，剪碎，放入研钵中，加入5ml磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 rpm 离心 15 min ，上清液即为粗酶液。 2、取1ml酶液，用磷酸缓冲液定容至25ml。 3、取稀释液1mL，加入反应混合液3 mL，立即于470 nm 处测定吸光度（OD）值，每隔1min读数一次。 六、实验结果 式中： ΔA470 ——反应时间内OD变化值。 VT???——提取酶液总体积（mL）。 W???——植物鲜重（g）。 t??? ——反应时间（min）。 七、思考题 说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。 * * 1ml（油菜） —— 3ml 3 1ml（菠菜） —— 3ml 2 —— —— —— —— —— 1ml 3ml 1 4min 3min 2min 1min 酶液 磷酸缓冲液 反应混合物 试管号 过氧化物酶活性= ΔA470×VT W×t *