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铁皮石斛愈伤组织培养研究进展 方春夏 （浙江理工大学生命科学学院，浙江 杭州 310018） 摘要：近年来，市场对铁皮石斛的需求日趋增加，铁皮石斛的组织培养技术也日趋成熟，本文结合了近年来对铁皮石斛的组织培养研究，从不同外植体，培养基及其培养条件、激素及添加物等方面综述了铁皮石斛愈伤组织诱导的研究概况，并展望了其发展前景。 关键字：铁皮石斛 愈伤组织 培养 综述 Advance on the callus cultivation of Dendrobium candidum Wall.ex Lindl Fang Chunxia （Zhejiang Sci-Tech University, Zhejiang Hangzhou 310018） Abstruct: Recent years, the market demand of Dendrobium candidum Wall.ex Lindl is keeping improving, and the technology of culitivate it has become more and more mature. In this paper, I summarize the different explants, hormone, medium, and the culture conditions to the callus cultivate of Dendrobium candidum, further more, prospects the development of it. Key words: Dendrobium candidum Wall.ex Lindl; callus ;cultivate 铁皮石斛（ Dendrobium candidum Wall . ex Lindl）为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 外植体 铁皮石斛无性快繁采用的外植体材料主要有种胚、种子、茎段、叶片、根等，在不同的培养基上都能成功地组培快繁出铁皮石斛人工苗[2]。詹忠根[7-8]等以离体根尖细胞成功得诱导出了愈伤组织，并获得再生苗，但他们用叶肉原生质体作为外植体时，虽然得到了愈伤组织，却未获得再生苗。戴小英[5]等对铁皮石斛不同外植体组培快繁技术进行了比较研究，确定了其快繁体系以茎段外植体为宜。 基本培养基及培养条件 铁皮石斛组织培养一般采用的蔗糖浓度为3%，pH值5.6的固体培养基，培养基包括MS，1/2MS，改良MS，B5，N6，SH，KS，VW，1/2N6等，主要在于外植体来源不同所致。适宜光照周期为12h/d；温度以25℃左右为宜[9-18]；周雅琴[11]等概述出N6培养基对铁皮石斛胚的萌发和生长最好，而以茎尖作为培养材料，N6培养基诱导愈伤组织能力明显不如MS。杨立昌[21]等研究发现铁皮石斛愈伤组织在1/2MS培养基上的出芽率比MS培养基好。 潘超美[18]等以N6为基本培养基，加入植物激素，并以真菌提取物作诱导子，对类原球茎和愈伤组织进行诱导培养，结果表明铁皮石斛细胞胚的形成可由愈伤组织的表皮细胞内部细胞产生。魏小勇[20]对铁皮石斛原球茎悬浮培养进行了研究，选用了改良的MS液体培养基，首次报道了铁皮石斛原球茎悬浮系的建立。 激素及添加物 铁皮石斛的愈伤组织培养基激素主要为6-BA与NAA，添加物主要为一些天然有机物，如椰汁、苹果汁、土豆汁、马铃薯提取液等，这些都能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，对铁皮石斛原球茎的增殖和分化有促进作用。王福喜[17]通过实验发现附加6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA0.3mg/L的MS能使原球茎最快发育。杨立昌[21]等研究发现6-BA 3.0mg/L和NAA 0.1mg/L的组合对铁皮石斛愈伤组织增殖影响最大。詹忠根[7]等研究发现离体根尖在B5+2，4-D1.0g/L + 6-BA 3.0 mg/L中培养诱导出的愈伤组织褐化率高，不易转变为原球茎，将其转接到B5+NAA 0.5mg/L+6-BA1.0mg/L培养基中培养后愈伤组织分化发育良好。蒋向辉[4]等通过比较研究发现蔗糖浓度过高时，愈伤组织会由致密型转为疏松型，并出现衰老死亡现象。这也许是由于渗透压过高，细胞吸水困难，导致植物生长异常