生物工艺细胞离心分离剖析.pptVIP

* 发酵液的固液分离  发酵液固液分离手段 离心 微孔膜过滤 双水相萃取 泡沫分离 扩张床吸附 * * 离心，与过滤比较 优点：分离速度快、效率高、液相澄清度好，操作时卫生条件好优点，适于大规模分离过程 缺点：投资设备高，能耗大，固相干燥程度不如压滤操作。 有哪些形式离心呢？ 重力沉降（ 自己离心自己） 离心过滤 离心沉降 离心分离 * * 重力沉降 以液固沉降为例，重力沉降过程中固体颗粒受到重力，浮力和摩擦力的作用对球形的固体颗粒，当10-4Re1时(滞流区),当重力，浮力和摩擦力达到平衡时，球形固体颗粒沉降，沉降速度为 Stokes定律 * 相对离心力（离心分离因数，离心力强度） 悬浮粒子受到离心力的作用，将向离心管底部移动，沉降，这个粒子所受到的离心力与它受到的地球重力相比较，称为相对离心力（RCF），也称为分离因子。 从以上公式可看出RCF是与沉降的粒子质量无关的值。 * 沉降速度及沉降系数 S为单位离心场力作用下的粒子的沉降系数。 从以上得知：S是溶剂物性的函数，与温度及溶剂有关。1S=10-13s * 一些蛋白质的沉降系数 * 沉降时间 下列积分： 圆形颗粒完全沉降需要的时间 * K是转子的效率因子（通常K值为10—1,000或更大）。与转子大小和速度有关。 根据厂家提供的最大K值就可估计在一定的转速时具有一定沉降系数的某种颗粒的沉降时间。 BACK 离心的分离方法 * * 1.按离心形式分 ①离心过滤：在有孔转鼓的离心机中通过过滤介质分离悬浮液的过程为离心过滤 ②离心沉降：利用固液两相比重的差异在离心机无孔转鼓或管子中进行悬浮液沉降分离者为离心沉降。 ③离心分离：分离不同比重液体的过程为离心分离。 * 2.按离心的转速分 * 3.离心方法 分类 差速离心 区带离心 继续 * 差速离心法： 采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒，在不同离心速度及不同离心时间下分批离心的方法。 它是利用各种粒子密度的不同，因而在离心力场中其沉降速度亦不同，从而达到分离的目的。 * 缺点：每次沉降的沉淀粒子不是均一的，在某离心力下除了大粒子都沉淀外，部分中粒子和少部分小粒子也可能沉淀下来，且数目随着离心时间的延长而增加。故不容易得到粒度均匀的粒子，需要将沉淀重新悬浮、洗涤，再次离心，反复数次，才有较好效果。 一般用于 分离沉降系数相差较大的粒子。 * * * 例子 BACK * 2、区带离心（zonal centrifugation） 样品在一惰性密度梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定离心力把颗粒分配到密度梯度某些特定位置上，形成不同区带的沉降方法。 根据离心操作条件的不同，分 差速区带离心和平衡区带离心2种。 优点；分离效果好，适用范围广，颗粒不易失活变形。 缺点；离心时间长，需要制备梯度，操作复杂。 BACK * （1）差速区带离心法 A：原理 把样品铺放在一个事先制备的连续的密度梯度上，在垂直于轴方向上的近轴处（x1）介质密度最小，离轴远处（x2）密度最大，但最大密度ρL一般小于样品中最小粒子的密度ρs。这样，所有的粒子的沉降速率dx/dt＞0。离心一定时间后，沉降颗粒逐渐分开，最后形成一系列的界面清楚的不连续的区带。