实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用讲解.doc

实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用 摘要:实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已在动植物基因工程,微生物和医学领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理，检测方法的原理、优缺点进行了评述,重点及创新点是对实时荧光定量PCR技术在医学领域，食品行业，植物方面的应用进行了比较全面的综述,并对实时荧光定量PCR技术的普及应用及领域的前景做了进一步的展望。 关键词：实时荧光定量PCR；应用；展望 Research progress and application of real-time PCR technology Abstract: Real-time PCR technology to detect PCR product by fluorescence quantitative signal strength to achieve the purpose , the technology not only to achieve the PCR from qualitative to quantitative leap , and compared with conventional PCR, it is more specific , effective solution to PCR contamination problem , degree of automation , has been widely used in genetic engineering of plants and animals , microbes and medicine fields . In this paper, the principle of real-time PCR technology, principles , testing methods, advantages and disadvantages are reviewed , the focus and innovation is a real-time PCR technology in the field of medicine , food industry, plant aspects of the application of a more comprehensive overview , prospects and real-time PCR technology in the field of universal application and made a further outlook . Keywords: Real-time quantitative PCR; application ; Outlook 聚合酶链反应(PCR)技术自1985年问世以来，以其灵敏性高、特异性强和速度快在分子生物学等科研领域得到了广泛应用。但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高；因此，使其应用受到限制。实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点，已成为了分子生物学研究的重要工具。文章对实时荧光定量PCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进行了综述。 1.实时荧光定量PCR技术概述 1.1 实时荧光定量PCR技术的原理 所谓实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团利用荧光积累实时监测整个PCR进程最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法实时荧光定量PCR是在反应体系中加入荧光基团使产物的数量与检测到的荧光强度。在PCR反应早期,不能将产生荧光的水平与背景明显区别,之后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期,因此可以在指数期的某一点上检测PCR产物的量,并由此推断起始模板含量。PCR采用参数“Ct”值，Ct值也称阈值循环(threshold cycle),指PCR循环过程中,荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数,也就是每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。研究结果表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准样品可作出标准曲线,因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。1 实时荧光定量PCR的标准扩算曲线 1.2 实时荧光定量PCR技术的检测方法 实时荧光技术PCR是在扩增产物聚集的过程中连续检测,即“实时”检测,根据在指数扩增期的