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大挑作品正文格式要求 标题为标准三号黑体字，居中；有副标题者，副标题另起，前面加破折号，字体为小三号黑体 小标题一般单独占行，前空两个汉字字符，所有级别小标题均用标准四号加粗楷体字 正文用四号楷体字，1.25倍行距 参考文献：英文文献用五号Times New Rome，中文文献用五号楷体 标题 ——副标题 理科： 1.一级标题（一级小标题用标准四号加粗楷体字） 1.1二级标题（其余小标题用四号加粗楷体） 1.1.1三级标题 1.1.1.1四级标题 正文（正文用四号楷体字，1.25倍行距） 参考文献 [1] Chen G, Ito Y, Imanishi Y, et al. Photoimmobilization of sulfated hyaluronic acid forantithrombogenicity[J]. Bioconjugate Chem ,1997, 8 : 730–734 [2]刘建源. B-干扰素及其临床应用[J]. 微生物学免疫学进展, 2000, 28(3): 91-94 文科： 一、一级标题（所有级别小标题均用四号加粗楷体字） （一）二级标题 1.三级标题 （1）四级标题 示例： 细胞因子载体药物对HeLa细胞凋亡的长效诱导活性 关燕清 彭仕娟 陈文晓 杨鑫华 欧敏雅 张荷花 钟炼敏 （华南师范大学生命科学学院，广州 510631） 摘要：采用光化学固定化方法将干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）共固定化在12孔聚苯乙烯培养板(PSt)上。无血清培养子宫颈癌（HeLa）细胞，通过动态细胞计数跟踪、倒置显微镜观察，研究细胞因子药物对HeLa细胞凋亡诱导作用的长效活性。结果表明，共固定化干扰素和肿瘤坏死因子能显著诱导HeLa细胞的细胞凋亡，在18天内，细胞发生了典型的细胞凋亡，最高抑制活性可达94.12%,未见细胞有重新生长的现象。 关键字：光固定化 人重组肿瘤坏死因子-α 重组人干扰素-γ 子宫颈癌细胞 子宫颈癌（HeLa）是常见的妇科恶性肿瘤之一，全世界每年约有50万新发子宫颈癌，在中国约有13万，居妇科恶性肿瘤第一位。在临床上常见的宫颈癌治疗方法有手术治疗，药物治疗和物理治疗。但化学药物和放射药物的选择性不高，它们既能抑制和杀伤肿瘤细胞，也可损伤体内正常组织和细胞，在治疗中出现明显的毒副作用；而物理疗法，如激光、冷冻、电灼等治疗较多出现活动性渗血，造成下腹隐痛不适，出现阴道流液甚至感染等副作用，给病人带来极大的生理上和心理上的痛苦。 目前，寻求降低治疗毒副作用、减轻病人痛苦、提高疗效的抗癌药物和治疗方法是肿瘤研究工作者的主要目标。 干扰素(IFN)是诱导细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的一类蛋白质。经过30多年的临床研究和应用,已证明它是一种重要的广谱抗病毒、抗肿瘤治疗药物。肿瘤坏死因子（TNF）是迄今发现的抗癌作用最强的细胞因子。IFN与TNF协同抗肿瘤，可在一定程度上减轻TNF的毒副反应，我们的前期研究也证明了两者的协同作用抑制率明显高于单独使用任何一种细胞因子的抑制率，同时降低了单一细胞因子的剂量。 高分子载体药物具有缓释、长效等优势，已成为新型药物的发展方向之一。利用光化学固定法可以将各种多肽、酶、生长因子、蛋白质等接枝到生物医用高分子材料表面，制备出具有各种活性、各种用途的生物材料。Ito 已经利用光固定法成功地将生长因子[1]、硫酸盐处理的透明质酸[2]、肝磷脂[3]、热敏聚合物 [4] 、促红细胞生成素[5]、β-半乳糖衍生物[6]、pullulan[7]固定在各种材料表面上，并进行体外活性研究。研究表明，固定化生长因子比游离状态的生长因子的传递信号作用时间长[1]，光固定后的促红细胞生成素仍然具有刺激细胞活性，且其活性比游离状态的高[5] 。 我们曾经做过共固定化(TNF-α+ IFN-γ)药物诱导HeLa细胞凋亡六天的研究，结果表明，固定药物诱导第五天即达到92％的癌细胞抑制率，而游离药物第三天出现抑制高峰后，到第五天，癌细胞抑制率已经下降到41％。在前期研究的基础上，本研究将两种细胞因子共同偶联12孔组织培养聚苯乙烯基板，通过18天的体外诱导培养，对固定药物的长效性及失效期做进一步研究。 1材料与方法 1.1 材料来源 重组人干扰素-γ购自珠海丽珠生物工程制药厂，重组人肿瘤坏死因子-α购自上海赛达生物药业有限公司，二甲基甲酰胺（DMF）、N-（4-叠氮苯甲酸基）琥珀亚酰胺购自sigma公司。12孔组织培养板为BIOFIL公司产品。 RPMI medium 1640、胰酶为GIBCOBRI公司产品。新小牛血清购自杭州四季春生物工程材料研究所。人子宫颈癌细胞(HeLa细胞系)由中山医科大学动物中心提供，经本实验