实验1-细菌的形态及特殊结构观察.pptVIP

医学微生物学实验 课程说明 分值比例：理论考核占70%，实验考核占30%，实验包括实验操作及实验报告成绩、笔试成绩。 实验目的与要求 医学微生物学实验是理论与实验研究的技术基础。通过实验，加深、巩固对理论内容的理解与记忆； 学习、掌握有关病原微生物学的基本操作技术，树立无菌观念； 更重要的是通过实验要养成实事求是的科学态度和独立分析问题与解决问题的能力。为开展有关疾病的诊断与防治、为从事病原生物的科学研究工作所必要的实验方法与技术打下一定的基础。  （一）实验前要做好实验预习，进实验室只带必要的文具、讲义，并穿工作服。 （二）实验室内应保持清洁、安静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、饮食、开玩笑以及玩弄手机等。 实验一细菌的形态及特殊结构观察 一、显微镜油镜的使用和保养 二、革兰染色 三、细菌的形态学观察 实验目的与要求 要求熟练掌握显微镜油镜的使用方法，同时掌握油镜的保养方法。 一、显微镜油镜的使用和保养 (一)显微镜基本知识 3）调焦距：换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使载物台上升至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。 双眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使载物台下降，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器，使物像完全清晰，即可正式观察。 注意事项：轻轻转动粗调螺旋，避免压碎玻片。 4）画图：细菌形态图 二、革兰氏染色 目的要求 了解革兰染色法的原理 掌握革兰染色的方法以及意义 不染色标本检查 应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法 压滴法 悬滴法 细菌染色的方法 单染法:采用一种染料染色,只能观察细菌的形态和排列特征，不能观察细菌的染色特性和进行鉴别。 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 革兰染色法 该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌学家革兰于1884年创建的,至今仍广泛应用。 革兰染色法的原理 ★渗透学说：与细胞壁结构有关 革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阴性菌细胞壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶紫碘复合物脱出。 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关 革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的复合物，不易被酒精脱出。 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关 革兰阳性菌等电点低（pI）为2~3，在中性或碱性环境中所带负电荷多；革兰阳性菌pI为4~5，所带负电荷少，影响结合染色的多少 实验材料与方法 材料: 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物 染液：结晶紫染液、卢戈碘液 95%酒清、稀释复红 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等 方法： 细菌标本片的制作：涂片、干燥、固定 革兰染色：初染、媒染、脱色、复染 油镜使用：观察染色结果并记录 染色标本检查的基本程序 涂片－→干燥－→固定－→染色 ★涂片：接种环灭菌、平板取材、细菌涂布 ★干燥：自然干燥、热空气干燥 ★固定：通过火焰外焰三次 ★染色：初染、媒染、脱色、复染 革兰染色法（Gram染色） 染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液 95％乙醇、稀释复红 染色方法： 革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌 染色结果 革兰染色意义 ★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性 影响革兰染色的因素 操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短 染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长 细菌因素： ★细菌种类 ★细菌菌龄 实验目的和要求 认识细菌的基本形态和特殊结构。 实验报告基本格式 ?????医学微生物学实验报告 实验项目名称：********** ??一、实验目的： ?? ??二、实验原理： ??三、实验材料： ? ??四、实验方法： ????? ? ??五、实验结果： ? 思考题 1.油镜的使用方法及用毕处理 2. 革兰染色的意义 三、细菌基本形态和特殊结构的观察 细菌的基本形态可分为球菌、杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。 （一）细菌基本形态的观察 1．球菌： 如葡萄球菌经结晶紫染色后为球状，常堆集成葡萄串状，呈紫色。 2．杆菌： 如大肠杆菌经复红染色后呈淡红色杆状，两