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一、实验目的 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜、鞭毛 二、实验原理 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。 革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。 G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 细菌的特殊形态结构 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 鞭毛：运动，菌落形态。 三、实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（24h培养物） 革兰氏染色液一套 四、实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢观察 观看鞭毛、荚膜的示范片 绘图、写实验报告 革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 枯草杆菌芽孢的观察 细菌鞭毛的观察 细菌荚膜的观察 五、实验结果 记录所观察到的三种菌革兰氏染色结果的差别 记录枯草杆菌Gram染色结果，并判断是阳性还是阴性 六、问题与讨论 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？为什么? * * 实验二 革兰氏染色及细菌特殊结构观察 2006.03.08 荚膜 *
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