- 1、本文档共15页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
生物发光和化学发光在生物技术中的应用
最近的一些分子生物学进展使得一些生物技术工具极大提高了生物发光和化学发光的检测和快速应用。这些发展方便了体外和体内持续检测生物过程(如基因表达,蛋白质-蛋白质相互间作用和疾病的进程),可应用于临床、诊断、和药物开发等。而且,结合发光酶或某些在基因水平有生物特异结合位点的发光蛋白发展了超敏感和选择性的生物分析工具,如重组细胞生物传感器,免疫分析和核酸杂交系统。发光分析信号的高度可侦测性使得它非常适合于微小化的生物分析装置(如微矩阵,微流设备和高密度的微孔板)以用于小量样品体积的基因和蛋白的高通量筛选。
自从20多年前,Marlene DeLuca’s第一个成功的获得表达萤火虫荧光素酶基因(luc基因)的转基因烟草以来,生物发光的应用进入了一个新时代。生物发光和化学发光(BL/CL)的主要特点就在于发光信号的高度可测性,可以用PMT(光电倍增管)和CCD成像系统来检测极少量的光子信号。BL是属于CL范畴之内,CL反应的特点是高光子产生效率,BL为05-0.8?,CL为0.1-0.001。因此BL/CL的检测极限可以达到10-18到10-21摩尔,这显然要比其它的光学技术强的多。
BL/CL已经发展出了很多具体的分析方法来诊断目前微摩尔或纳摩尔级的生物样本。通过BL/CL结合酶反应,如氧化酶、脱氢酶和激酶等,就可以达到如此的检测灵敏度。然而,以发光技术为基础的分析主要还仅仅停留在作为一个诊断工具。如果BL/CL的潜能能够得到开发,那么许多稀有的微量样品也可以通过一个便宜、可靠甚至是点对点的方式进行测量。
分子生物学和生物技术持续地进展产生了一些新的BL/CL试剂,包括重组和突变酶及相关基因,可以作为报告剂或探针。这些工具的获得,再加上新的CL高效底物,促进了革新性的生物分析技术的出现,用于许多靶标的超敏感检测。
?
新的BL/CL生物技术工具
新的BL/CL报告基因
报告基因技术代表了分子生物学最近主要的进展之一。报告基因是一段DNA序列,编码一个很容易被侦测到的蛋白或酶。它们可以人工引入到一个细胞内来监测基因的表达,以得到整体细胞生物传感器或细胞定位的作用。报告基因技术应用到研发BL/CL全细胞生物传感器的原理如图1a。
目前,细菌荧光素酶基因(如陆上的Photorhabdus luminescens和海洋中Vibrio harveyi细菌的lux基因),真核的来自于萤火虫Photinus pyralis和海参Renilla reniformis的luc和ruc基因是广泛应用的BL报告基因。此外,一些新的基因cDNAs也已克隆和表达。有意思的是一些新的基因,如那些能够发射红光和绿光的Phrixothrix hirtus荧光素酶,各种突变的发不同波长光的萤火虫荧光素酶。不同的荧光素酶的特性如表1。此外最近克隆和纯化的重组辣根过氧化物酶(HRP)成为一个新的生物技术工具,在不久的将来有较大的期待。实际上,高效的HRP的底物已经商业化。HRP是与CL检测组合应用最广泛的酶之一。
?
双报告基因系统
在多重发光测试中,信号是同时产生,测试是独立进行。可以测试不同的发光动力学反应或不同的发射光波。可选择的是,反应也可以按顺序被促发,如商业化的Promega公司提供的Renilla和Firefly荧光素酶双报告基因试剂。双报告系统的原理如Figure 1b.
双重分析的BL/CL分析采用连续的闪烁型(Flash)发光形式,如发光蛋白水母蛋白和acridinium-9-carboxamide标记。这种方法可以在一个反应管里定量两个分析物和测试两个发光反应。因为它建立在flash型的发光上,分析测试需要非常短的时间,所以适用于高通量的筛选。
?
图1.?新的生物技术工具。(a)利用报告基因技术研发的生物发光和化学发光(BL/CL)全细胞生物传感器。一个被分析物质或者刺激会特异性的激活控制基因表达和蛋白合成的调控序列,再利用BL/CL技术进行检测。(b)双报告系统。控制蛋白的信号会组成性的表达,以作为一个内部参照,对以来于被分析物/刺激的信号进行校正以减小实验变异;另一种方式是在同一系统中,使用两个基因同时或先后检测两种分析物。(c)一个报告基因蛋白与一个结合蛋白融合形成BL/CL双功能融合蛋白。(d)包含有相应结合蛋白(如MagA蛋白)的融合蛋白可以被细菌磁性颗粒特异性捕获。
BL/CL双功能分子
目前已有报道,一个双功能的分子既可以作为萤火虫荧光素酶的底物,又可以作为HRP的底物。通过这种方法,因为不同的发光光谱,就可在同一个反应孔中可以用两个酶标记并独立测试。
通过编码BL酶的基因或发光蛋白基因与第二个基因(编码结合蛋白,如蛋白A,蛋白G,链霉亲和素,或生物素受体肽)形成融合蛋白可以广泛用于免疫分析或免疫
您可能关注的文档
- 烧伤外科基试题.doc
- 烧伤与自课件.ppt
- 烧伤整形医学论文范文汇总.doc
- 烧伤治疗关键.ppt
- 生产计划控制课后习题.doc
- 生产力促中心统计报表.doc
- 生产实习狂犬疫苗.doc
- 生产与增20110713.ppt
- 生孩后保体形方法.doc
- 生化2蛋质化学.ppt
- 2024年04月陕西西北政法大学专职辅导员招考聘用笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月黑龙江牡丹江市直及城区事业单位招考聘用167人笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月黑龙江省密山市2024年部分事业单位公开招考68名工作人员笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月黑龙江省富锦市2024年公开招考45名社区网格员笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月重庆市大足区事业单位面向应届生招考聘用84人笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月黑龙江海林市人才招考聘用134人笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月黑龙江省会机关2024年公开遴选2名公务员笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年05月中共崇左市委政研室(改革办)公开招聘1人(广西)笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年04月陕西省镇坪县发展和改革局下属事业单位2024年公开考选5名工作人员笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
- 2024年05月上海政法学院招考聘用笔试上岸试题历年典型考题与考点剖析附带答案解析.docx
文档评论(0)