生物化学37章.ppt

第37章 遗传密码 三、遗传密码的破译 遗传密码的理论推测 推测的密码子格式 推测的密码子格式 Crick的实验 Crick等的实验结果 无细胞翻译系统 体外翻译研究密码子 无序poly UG对氨基酸的密码（U:G = 5:1) 三核苷酸取代mRNA的实验 三核苷酸取代mRNA的实验 重复序列共聚核苷酸指导下多聚氨基酸的合成 遗传密码表 四、遗传密码的基本特性 移码突变 重叠基因的阅读框 （二）密码的简并性 氨基酸密码子数与氨基酸使用频率的关系 （三）密码的变偶性 反密码子与密码子之间的配对 反密码子与密码子之间的配对 （四）密码的通用性和变异性 线粒体中变异的密码子 密码子的变异性 蛋白质中硒代半胱氨酸的掺入 蛋白质中硒代半胱氨酸的掺入 （五）密码的防错系统 电极的名称与电极上发生的反应 * (Genetic code) 一、DNA是遗传信息的携带分子 二、RNA传递和加工遗传信息 三、遗传密码的破译 四、遗传密码的基本特性 蛋白质氨基酸序列的信息存在于核酸的核苷酸序列中，那么它们之间的对应关系是什么呢？ 1954年物理学家Gamov G首先对遗传密码进行探讨。核酸分子中只有4种碱基，要为蛋白质分子中20种氨基酸编码，显然一种碱基代表一种氨基酸是不行的；如果每两个碱基代表一个氨基酸，4种碱基也只能编码42 =16种氨基酸的信息。所以至少需要3个碱基编码一种氨基酸，这样4种碱基可以编码43 =64种氨基酸的信息。 根据理论推测，密码子（codon）应该是三联体（triplet），那么密码子是重叠的还是不重叠的？Gamov指出，重叠的密码子更为经济。但是重叠密码子使氨基酸序列中每一个氨基酸都受前后氨基酸的约束，显然自由度不够。 1961年Crick及其同事提供了确切的证据，证明三联体密码子学说是正确的。他们研究了T4噬菌体γⅡ位点A和B两个顺反子变异的影响，这两个基因与噬菌体能否感染大肠杆菌K株有关。实验结果见后： Crick等的实验结果表明三联体密码是非重叠的，而且连续编码无标点符号隔开。 CAT CAT CAT CAT CAT CAT 正常 -1 CAT CA∨C ATC ATC ATC ATC 缺陷 -1+1 CAT CA∨C AXT CAT CAT CAT 正常 +3 CAX TXC ATX CAT CAT CAT 正常 此实验表明密码子是三联体。 ∨ 缺少一个碱基 X 增加一个碱 基 Nirenberg等将大肠杆菌破碎，离心除去细胞碎片，上清液中含有蛋白质合成所需的各种成分，其中包括DNA、mRNA、tRNA、核糖体、氨酰tRNA合成酶以及蛋白质合成必需的各种因子。 将上清液保温一段时间，内源mRNA被降解，该系统自身蛋白质的合成停止。当补充外源mRNA以及ATP、GTP和氨基酸等成分，再在37℃保温就能合成新的蛋白质。为了检测某种氨基酸是否掺入了新合成的蛋白质，需将氨基酸用放射性标记。 Nirenberg等早期实验使用的mRNA是多聚尿嘧啶核苷酸，发现翻译出的肽链是多聚苯丙氨酸，说明UUU代表了苯丙氨酸。 用同样的方法研究出poly C指导多聚脯氨酸合成，poly A指导多聚赖氨酸合成，说明CCC代表了脯氨酸，AAA代表了赖氨酸。 他们实验时使用的Mg2+浓度较高，以致合成的均聚核苷酸不需要起始密码子就可以起始翻译。此时翻译的起点是任意的。 — 0.8 GGG Gly（4） Trp（5） 4 UGG GUG GGU Cys（20） Val（20） 20 UUG UGU GUU Phe（100） 100 UUU 氨基酸掺入的相对分子数 密码子出现的相对频率 可能的密码子 此表有问题 1964年Nirenberg发现，用人工合成的三核苷酸取代mRNA，在没有GTP时，不能合成蛋白质，但三核苷酸却能与其对应的氨酰tRNA一起结合在核糖体上。将此反应混合物通过硝酸纤维素膜过滤，核糖体和三核苷酸以及特异结合的氨酰tRNA形成的复合物能留在膜上。用此方法，可以直接测定三核苷酸与氨基酸的对应关系。 (Asp)n, (Met)n, GAU, AUG, UGA (GAU)n (Leu)n, (Cys)n, (Val)n UUG, UGU, GUU (UUG)n (Lys)n, (Arg)n, (Glu)n AAG, AGA, GAA (AAG)n (Cys-Va