第二章基因工程相关技术预案.ppt

基因 扩增技术---PCR （3）概念 首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。 类似于DNA的体内复制。 （3）Taq DNA 聚合酶 PCR仪 2. PCR技术的原理 （1）DNA模板变性 （2）DNA模板与引物复性 （3）DNA链的延伸 （4）新一轮循环开始 3. PCR的过程 （3）第三步 延伸（extend） 温度循环 4. PCR的特点 （4）简便 5. 影响 PCR的因素 ② 最适温度高 ④ Taq DNA聚合酶的激活剂 （2）其它耐热的 DNA聚合酶 （3）引物（primer) ②引物的长度 ③引物的碱基序列 ④引物的碱基组成 3）避免形成引物二聚体（dimer） ⑤引物的Tm值 （4）模板（template) （5）dNTPs （6）Mg 2+ 的浓度 7. PCR技术的应用 （2）基因的体外诱变 核酸的分子杂交 核酸分子杂交的基本原理 DNA变性 方法 热变性：90~100℃ 酸碱变性：常采用碱变性 化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等 DNA复性或