《2.1基因工程的基本操作程序》.ppt

1.２《基因工程的基本操作程序》 专题１《基因工程》 ①载体与表达载体的区别： 二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入DNA、转录、翻译 鉴定： * 基因工程的基本操作程序主要包括 四个基本步骤：P8 1）目的基因的获取 (前提） 2）基因表达载体的构建（核心） 3）将目的基因导入受体细胞（关键） 4）目的基因的检测与鉴定 （保证） 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是指: 编码蛋白质的基因 请举出三个以上的例子 P9 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? P9 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库： 2.基因文库的分类: 种类 基因组文库：包含有一种生物的所有的基因。 部分基因文库：只包含了一种生物的一部分 基因。如：cDNA文库 cDNA即互补DNA，指的是以mRNA为模板，通过 逆转录作用形成单链DNA（单链DNA→双链 DNA 即cDNA） 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 2、利用PCR技术扩增目的基因 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补结合） 适温延伸（在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链） 重复循环 2、具体过程 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ 、 ___________.等 ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提条件） PCR技术扩增与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 3、人工合成的目的基因 2、基因表达载体的组成： 复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因 目的：使目的基因在受体细胞中稳定 存在，并遗传给后代 注意 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，DNA连接酶，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化： （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 ③过程： （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵）