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非核素标记检测端粒酶活性的研究 　　Kim［1］于1994年借助PCR技术建立了灵敏的端粒酶检测方法——端粒重复片段扩增(telomerase repeat amplification protocol，TRAP)。我们对Kim的方法加以改进，建立了简便、非同位素的银染检测法，检测了脑瘤、肠癌、食管癌中端粒酶的活性。 　　一、材料与方法 　　1.总蛋白提取：手术后取下的活组织，液氮保存。(1)100 ml提取液中含10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)；1 mmol/L MgCl2；1 mmol/L EGTA,0.5 mmol/L β-巯基乙醇；0.5% CHAPS，体积分数为10%的甘油。(2)组织中提取总蛋白：取约30 mg组织用无菌眼科手术剪尽量剪碎，加入200 μl提取液，冰浴30 min后，4 ℃ 1 600 g离心20 min。吸取上清约150 μl待测。 　　2.TRAP反应：(1)引物及稀释：RNA模板逆转录引物TS：5′-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3′18mer，MW=5 524，浓度为0.541 g/L。PCR引物CX：5′-CCTTACCCTTACCCTTACCC 　　TAA3′24mer,MW=7 104,浓度为0.