观察复方丹参片对糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用.docVIP

观察复方丹参片对糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用 【关键词】 复方丹参片；,,糖尿病周围神经病变；,,山梨醇 　　摘要：目的观察复方丹参片对糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用，并分析其作用机制。方法采用链脲佐菌素诱发DM大鼠模型。造膜1周后开始用不同剂量的复方丹参片进行治疗。用药4周后观察各组大鼠血糖（FBG）、糖化血清蛋白（GSP）、体重（W）、坐骨神经山梨醇、红细胞山梨醇（RBCS）含量的变化，同时测定大鼠坐骨神经传导速度。结果复方丹参片能降低糖尿病大鼠糖化血清蛋白、坐骨神经和红细胞山梨醇的含量，增加坐骨神经传导速度。结论复方丹参片对糖尿病大鼠周围神经病变有防治作用。 　　关键词：复方丹参片； 糖尿病周围神经病变； 山梨醇 　　糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy, DPN）是糖尿病（DM）常见的慢性并发症之一。高血糖引起糖基化终末产物（advanced glycosylation end products, AGEs）形成增加、多元醇代谢异常是导致糖尿病周围神经病变的重要原因之一。本实验用链脲佐菌素制成大鼠DM模型，观察复方丹参片对实验性糖尿病大鼠糖化血清蛋白、坐骨神经和红细胞山梨醇水平的影响，并探讨其作用机制。 　　1 器材与方法 　　1.1 药品与试剂复方丹参片，由宁夏启元药业有限责任公司提供，批号051029（每片含丹参酮ⅡA0.38 mg，丹参酚酸B5.0 mg），实验前粉碎，过80目筛，溶于新鲜蒸馏水中，配成适当浓度贮存于4℃冰箱中备用；链脲佐菌素，（streptozotocin, STZ）、山梨醇为美国Sigma公司产品。 　　1.2 仪器美国贝克曼公司DU640紫外/可见分光光度计，南京产大白鼠恒温手术台，美国罗氏公司稳豪型全微量血糖检测仪，成都泰孟公司BL420生物机能实验系统，德国Herml 2W323H低温超速离心机，宁波产DY89Ⅰ型电动玻璃匀浆机。 　　1.3 动物模型建立与分组SD清洁级健康雄性大鼠（250±20）g 58只，由本院实验动物中心提供，合格证号SCXK（宁）2005~0001。正常自由进食饮水、适应性观察1周，随机分为正常对照组10只和造膜组织48只。造膜组大鼠于禁食14 h后腹腔一次性注射STZ60 mg/kg（溶于0.1 mol/L枸橼酸缓冲液中，pH4.5，配成1%的浓度，新鲜配制），72 h后由尾静脉采血测血糖，凡血糖值大于16 mmol/L即为糖尿病模型鼠。 　　1.4 给药方法造膜后，复方丹参片按生药量计算，以临床常用剂量折成大鼠近似等效剂量，大剂量组灌胃4.13 g/kg，中剂量组灌胃2.08 g/kg，小剂量组灌胃1.04 g/kg［1，2］；阳性对照组和正常对照组灌胃相同体积的蒸馏水；5组均灌胃1次/d。以上处理方法每2周根据体重变化随时调整。饲养期间饮水和饲料不加限制，连续给药4周。末次给药后禁食12 h，苯巴比妥腹腔注射麻醉，心腔取血检测相应指标。 　　1.5 指标测定一般性指标测定。每2周测定1次大鼠24 h进食量、饮水量及体重。采用浙江东瓯生物工程有限公司的试剂盒检测糖化血清蛋白含量。 　　1.5.1 红细胞、坐骨神经山梨醇含量测定参照［3］方法，采用化学法测定。红细胞样品处理：肝素抗凝血，3 000 r/min离心15 min，弃血浆，留取红细胞用10倍体积生理盐水洗涤3次，压积红细胞用生理盐水1∶3稀释，取0.5 ml红细胞稀释液，加等量双蒸水破膜，然后加2.3 ml预冷6%过氯酸沉淀蛋白，4 000 r/min离心5 min，取上清液则定。结果以μmol/g组织表示，血红蛋白定量采用氰化高铁血红蛋白法［4］。坐骨神经样品处理：大鼠腹腔注射苯巴比妥麻醉后，俯卧位固定，分离并取出双侧坐骨神经，用生理盐水洗净血液，加4%预冷过氯酸1.5 ml匀浆，3 000 r/min离心，10 s，3次，取上清液测定。结果以μmol/g组织表示［4］。 　　1.5.2 坐骨神经传导速度测定参照文献［5］方法，采用成都泰孟BL420生物机能实验系统处理，结果以动作电位出现的潜伏期与动作电位传导的距离比值（m/s）表示。 　　1.6 统计学处理数据用SPSS11.5统计学软件处理，各样本均数比较采用单用因素方差分析。 　　2 结果 　　2.1 复方丹参片对STZ糖尿病大鼠血糖、体重的影响造膜前各组动物体重均无明显差异，造膜后1周与正常对照组相比，阳性对照组动物血糖明显升高，体重明显减轻（P＜0.05）。治疗4周后，治疗组大鼠血糖虽较DM组低，体重增加，但无统计学意义（P＞0.05）。 　　2.2 复方丹参片对STZ糖尿病大鼠神经传导速度的