过量碘化物对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的作用.docVIP

过量碘化物对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的作用 作者：田英娟，田园，刘超，叶亮 【摘要】 目的 观察过量碘化物对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的诱导作用，并对机制作初步探讨。方法 取健康的猪甲状腺细胞培养24h后，加入不同浓度的碘化钾(KI)，观察细胞的形态改变；琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术分析细胞DNA的降解；MDA法测定细胞膜的脂质过氧化程度。结果 加入KI 24h后，荧光染色镜下观察可见凋亡细胞；琼脂糖凝胶电泳呈梯状带；流式细胞术见亚二倍体（凋亡）峰，细胞凋亡率和脂质过氧化产物随碘化物浓度的升高而升高(Plt;0.05)。结论 过量碘化物诱导了原代培养的猪甲状腺细胞凋亡，可能通过活性氧机制启动凋亡。 【关键词】 甲状腺细胞凋亡；过量碘；活性氧 【Abstract】 Objective To study the effect of excess iodide on the primary cultured pig and its mechnism. Methods We employed the primary cultured pig thyroid cells. The apoptosis was evaluated by AQ-stained fluorescin， DNA ladder by gel electrophoresis and subdiploidy by propidium iodide-stained flow cytometry. The level of lipid peroxide under KI treatment was determined by measuring the production of thiobarbituric acid reactive substances.Results Thyroid cells treated with iodide excess at different concentration underwent apoptosis. Iodide displayed a dose-dependent apoptosis index and a dose-dependent generation of TBARS levels.Conclusion Iodide excess induce the apoptosis in the primary cultured pig thyroid cells. This type of apoptosis seems to be activated by reactive oxygen species. 【Key words】 thyroid cell apoptosis；iodide excess；reactive oxygen species 碘化物在人类的日常生活中具有重要的意义。过量碘化物对甲状腺及培养的甲状腺细胞的毒性效应早已证实，近几十年来从凋亡角度对这种作用作了一些研究［1～3］。目前过量碘化物对体外培养的猪甲状腺细胞的作用未见报道，其诱导甲状腺细胞凋亡的机制尚未阐明。本实验观察过量碘化物对原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的诱导作用，并对凋亡机制作初步研究。 1 材料与方法 1.1 主要试剂与仪器 F-12培养基为美国Gibco公司生产，促甲状腺激素(TSH)、胶原酶为美国sigma公司生产，荧光显微镜为日本Olympus BH-2型，流式细胞仪为美国Becton Dickinson公司产品。 1.2 甲状腺细胞培养 取适量的猪甲状腺组织(锦州肉联厂提供)PBS冲洗，剪碎倒入带有磁力搅拌子的三角烧瓶中，加入双酶消化；每隔15～20min取出上2/3的消化液，漂洗制成细胞悬液；消化完毕将细胞悬液通过100目筛网过滤，调整细胞数106/ml，接种于培养板上；置5%二氧化碳孵箱，在10%FCS、1u/LTSH的F-12培养基中培养，每2～3天更换培养基。 1.3 实验分组 甲状腺细胞正常培养24h后，加入处理因素并分组。空白对照组：不加其他处理因素；阳性对照组：放线菌酮（CHX）2×10-3g/L(终浓度)；阴性对照组：氯化钾60mmol/L(终浓度)；实验组：不同浓度的KI。所用浓度根据多次预实验的结果并参考文献资料［1］。 1.4 甲状腺细胞的形态学观察 在倒置显微镜下，观察各组培养细胞的形态及生长状况。培养24h后加入处理因素，再过24h收集细胞，经吖啶橙（AO）染色在荧光显微镜下观察。 1.5 琼脂糖凝胶电泳 取实验组（KI 1mmol/L，60mmol