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红曲菌株的分离纯化和鉴定 【摘要】 ［目的］对红腐乳中的红曲菌进行分离纯化和鉴定。［方法］根据红曲菌嗜酸、耐乙醇的生长特性，用含乙醇的麦芽汁、含乳酸的大米培养基分离红腐乳汁中的红曲菌，并用对数稀释平板法进行纯化。纯化后的红曲菌显微观察确定其属别。依照其在MEA培养基上25℃培养的菌落形态特征鉴定到种。［结果］从红腐乳中分离的两个菌株经鉴定M-1属丛毛红曲菌（M.pilosus），M-3属红曲红曲菌（M.anka）。［结论］红腐乳中分离的纯培养为红曲属真菌。 【关键词】 红曲菌；分离；纯化；鉴定 　　Abstract：［Objective］To isolate，purify and identify Monascus strains from red furu.［Method］Based on eosinophilic and ethanol tolerant characteristics of Monascus，stains were isolated from red furu by culturing on malt juice medium containing alcohol and rice medium containing lactic acid.Strains were purified using logarithmic plate dilution method，and then determined genera according to their micro-morphological characteristics.By culturing on malt extract agar medium with temperature of 25 degrees Celsius，strains were identified to species based on the morphological characteristics of colonies.［Result］M-1strain isolated from red furu was identified as Monascus pilosus and M-2 Monascus anka.［Conclusion］Strains isolated from red furn are Monascus fungi. 　　Key words：Monascus；isolation；purification；identification 红曲菌隶属真菌界（Eumycophyta）子囊菌门（Ascomycota）真子囊菌纲（Euascomycetes）散子囊菌目（Eurotiales）红曲菌科（Monascaceae）红曲属（Monascus）［1］，具有防腐，解毒；消食活血、健脾燥胃之功效［2］。我们根据红曲菌嗜酸、耐乙醇的生长特性［1］，对市售红腐乳中的红曲菌进行分离纯化，并对它们进行了形态学鉴定，为进一步发掘红曲菌生物资源做了有益探索。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　(1)原料：市售红腐乳、大米、琼脂粉、乙醇、乳酸，麦芽浸出粉（malt extract）。(2)麦芽汁：麦芽浸出粉3g，蒸馏水100ml，PH3.54.0，分装5ml/管，每管加95%乙醇2滴。(3)大米培养基大米10g，蒸馏水15ml，1%乳酸40ul。(4)麦芽汁培养基麦芽浸出粉6g，琼脂粉4g，蒸馏水200ml，PH5.0～6.0。(5)麦芽提取物琼脂（malt extract agar，MEA）培养基麦芽浸出粉2g，蛋白胨0.1g，葡萄糖2g，琼脂粉1.5g，蒸馏水100ml，PH6.0。 　　1.2 方法 　　1.2.1 分离 　　无菌条件下，红腐乳汁经2层纱布过滤，取0.1ml滤液于5ml麦芽汁，一式3管，空白对照1管。32℃培养，观察。挑取麦芽汁上长出的红色菌体少许，置于大米培养基中，一式3皿，空白对照1皿。32℃培养，观察。 　　1.2.2 纯化 　　从大米培养基上挑取红色菌体少许于1ml无菌生理盐水（NS）中，用对数稀释平板法［3，4］获得纯培养。 　　1.2.3 鉴定 　　取纯化后的红曲菌种，点种到MEA培养基32℃培养成熟。在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用解剖针挑取少许菌丝，用50％乙醇浸润，再用蒸馏水清洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来，盖上盖玻片(勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片)，制成水浸标本片，用显微镜观察。取纯化后的红曲菌种，点种到MEA培养基25℃培养，观察红曲菌落大小、形态、色泽，气生菌丝的产生情况。 　　2 结果