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黄连上清丸微生物限度检查方法学验证 【摘要】 目的：对黄连上清丸微生物限度检查方法进行方法学验证。方法：采用平皿记数法，分组分别使用5种实验菌验证。试验组取供试液加菌液注入培养基中培养。菌液组分别取各实验菌液注入培养基中培养。稀释剂对照组取稀释剂加菌液注入培养基中培养。供试品对照组取供试液注入培养基中培养。通过3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次试验的回收率。采用观察大肠埃希菌、大肠菌群与阴性金黄色葡萄球菌在相同环境下的培养来验证控制菌的检查方法。结果：各试验菌的回收率均高于70%，稀释剂对5种试验菌的回收率均高于70%。结论：采用常规法可以进行本品的微生物限度检查。 【关键词】 黄连上清丸 微生物限度检查方法 验证 Abstract Objective：To verify the microorganism limited inspecting method of Huanglian Shangqing pill. Method：Plate counting method was used to count. Trail liquid and bacterial liquid， five bacterial liquids，dilute liquid and bacterial liquid，trail liquid were respectively injected into culture medium of trial group，bacterial liquid group，dilution bilingual group，trail liquid control group. Every trail recovery rate was calculated in three independent trails. The control bacteria checking method was verified by observing cultivation of Escherichia coli，coliform and positive staphybococcus aureus under the same environment. Result：The rate of every trail bacteria was higher than 70%，and the rates of five diluted trail bacterias were higher than 70%. Conclusion：The microorganism limited inspecting of Huanglian Shangqing pill can be used. Key words Huanglian Shangqing pill; microorganism limited inspecting method; verification 黄连上清丸具有散风清热、泻火止痛的功效，用于治疗风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、牙齿疼痛、口舌生疮等。其疗效确切，患者认可，并为中国药典（2005年版）收载。生产企业为了适应市场需要和方便患者服用，申请将大蜜丸改变为水丸。现根据中国药典（2005年版）要求，对非规定灭菌制剂及其原料、辅料进行微生物限度检查，同时进行方法学验证。为确保检验方法的准确性和可靠性，对该品种的微生物限度检查进行了计数方法的验证及控制菌检查方法的验证，现将结果报道如下。 1 实验材料 黄连上清丸由山西万辉制药有限公司生产,批号20050709菌种包括枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］、金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］、大肠埃希菌［CMCC（B）44102］、白色念珠菌［CMCC（F）98001］、黑曲霉［CMCC（F）98003］，由北京生物制品检定所提供［1］。培养基包括营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、改良马丁液体培养基、改良马丁琼脂培养基，均由北京奥博星生物科技有限责任公司提供。 2 实验方法 2.1 菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10 mL营养肉汤中，35 ℃~37 ℃培养18 h~24 h，取此培养液1 mL加0.9%无菌氯化钠溶液9 mL，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5~10-7，使菌数约为（50~100）cfu/mL。接种白色念珠菌的新鲜培养物至1