黄芪多糖对糖尿病大鼠肾组织胰岛素受体及其底物1的影响.docVIP

黄芪多糖对糖尿病大鼠肾组织胰岛素受体及其底物1的影响 【摘要】 目的研究黄芪多糖（APS）对糖尿病大鼠肾组织胰岛素受体（IR）及胰岛素受体底物1（IRS1）表达的影响及其治疗糖尿病的作用机制。方法用APS治疗高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导糖尿病（DM）大鼠，检测血糖，IR及IRS1的变化，观察APS对糖尿病大鼠的作用。结果DM大鼠血糖含量明显升高（Plt;0.01），IR及IRS-1表达明显降低（Plt;0.01）；APS能明显增加DM大鼠IR及IRS-1的表达（Plt;0.01），降低血糖水平（Plt;0.01）。结论 APS可降低糖尿病大鼠血糖水平，其机制可能与提高糖尿病大鼠肾组织中IR，IRS1的表达，增加组织对胰岛素的敏感性，改善胰岛素信号传导有关。 【关键词】 黄芪多糖 糖尿病肾病 胰岛素受体 胰岛素受体底物1 糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)发病机制尚未完全阐明，已有研究证实直接或间接与高血糖有关，糖尿病状态下机体糖代谢严重障碍。胰岛素（insulin，Ins）是调节糖代谢最主要的激素，其生物效应由其靶细胞膜上胰岛素受体(insulin receptor, IR）介导，胰岛素受体底物-1（insulin receptor substrate-1,IRS1）是IR下游第一个底物分子，在其信号传导途径中起着极其重要的作用，已有的研究表明糖尿病状况下肾脏组织细胞膜胰岛素受体的数目和亲和力均存在异常［1，2］。本研究运用黄芪多糖（APS）治疗高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素（STZ）注射诱导糖尿病（Diabetes Mellitus，DM），拟进一步观察APS对糖尿病状态下肾脏组织IR与IRS1蛋白表达的影响，探讨其影响机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料健康清洁级雄性SD大鼠40只，体重180～200 g，由武汉大学实验动物中心提供。STZ，美国Sigma公司。APS溶液：APS从山西产黄芪根中提取制成粉剂，临用前用生理盐水新鲜配制成20 g/L的溶液。鼠IRS－1单克隆抗体，美国Neomarkers公司。兔InsR多克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司。SP试剂盒，北京中山生物技术公司。One touchⅡ血糖测定仪及试纸，美国Janson and Janson公司。切片机，国产LKB11800。显微镜，日本OlympasCH30。HPIAS1000型全自动图像分析系统。 　　1.2 方法 　　1.2.1 糖尿病模型的建立与分组 　　实验动物分为4组。正常对照组：给予普通饲料（60%碳水化合物，22%蛋白质，10%豆油脂肪，包括纤维素在内的其他成分8%）喂养，用等体积生理盐水灌胃处理5周。APS对照组：普通饲料，APS溶液［400 mg/（kg·d）］灌胃处理5周。DM组：给予高脂饲料（41%脂肪，41%碳水化合物和18%蛋白质），尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）（30 mg/kgSTZ，溶于0.1 mol/L柠檬酸缓冲盐溶液，pH 4.5），注射后动物自由进食，进水并维持高脂饮食，STZ注射72 h后，测动物空腹血糖，大于6.7 mmol/L者可诊断为糖尿病［3］。DM+APS组：空腹血糖大于6.7 mmol/L的动物继续喂以高脂饲料，同时APS溶液［400 mg/（kg·d）］灌胃处理5周。 　　1.2.2 各项指标检测 　　所有大鼠观察毛发、活动等情况，并取尾静脉血测空腹血糖。 　　1.2.3 IR与IRS-1蛋白的检测 　　处死动物后，取肾组织，4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切片（4 μm）；3%H2O2室温孵育10 min；5%～10%正常山羊血清封闭10 min；加入一抗，37℃孵育1～2 h；滴加生物素标记的二抗，37℃10 min；滴加辣根过氧化物酶标记的链卵白素，37℃10 min；DAB显色，室温3 min；苏木素复染1 min；酒精脱水；中性树胶封片。免疫组化图像分析应用高清晰彩色病理图像免疫组化测量系统（HPIAS1000），经标准灰度校正后，随机取5个视野，分别测定IR，IRS-1的平均光密度值（IDP）。 　　1.2.4 统计学处理 　　采用SPSS11.5统计软件进行，实验数据以均数±标准差(±s)表示,组间比较用t检验。Plt;0.01有显著性差异。 　　2 结 果 　　2.1 实验动物一般情况 　　DM大鼠毛发干枯、杂乱、脱落、蜷卧、活动减少。给APS治疗后，大鼠精神好转、毛发光整、有色泽、活动增多。 　　2.2 血糖 如表所示，DM组和DM+APS组血糖水平均高于对照组，差别有显著性（Plt;0.01），DM+