食管鳞癌组织芯片中mta1蛋白表达的免疫组织化学研究.docVIP

食管鳞癌组织芯片中MTA1蛋白表达的免疫组织化学研究 作者：钱海利，李云峰，于静，宋崇文，吕宁，张雪燕，梁萧，付明，林晨 【摘要】 目的 研究食管鳞癌组织中转移相关基因MTA1蛋白定位及表达水平的改变及与食管鳞癌进展、转移的关系。方法 应用食管鳞癌组织芯片通过免疫组织化学染色研究MTA1蛋白在食管癌中的表达情况。结果 MTA1蛋白在食管鳞癌组织中主要定位于胞核，在淋巴结转移灶中出现胞浆与胞核同时着色。正常组织与重度不典型增生、原位癌及癌组织之间差异有统计学意义，在食管鳞癌不同进展阶段的组织中MTA1表达逐渐升高，并且出现异位表达。结论 MTA1与食管鳞癌的侵袭和转移高度相关，在食管鳞癌的发展过程中可能发挥着重要作用，可作为判断食管癌侵袭及转移能力的辅助因子。 【关键词】 食管鳞癌；MTA1；转移；组织芯片 在肿瘤细胞的生物学特征中，以侵袭性和转移性最为关键，也是恶性肿瘤的最重要标志，因此，对肿瘤转移机制及治疗方法的研究显得十分迫切。 MTA1是一个在肿瘤转移过程中表达上调的基因。它是Toh等用差异cDNA文库扫描技术从高转移大鼠乳腺腺癌细胞系中发现的，随后用同源方法发现了人的同源MTA1基因[1]。该基因产物是核小体重塑与脱乙酰基复合体 (nuclear remodeling and deacetylation complex，NuRD)的成分，通过影响染色质的状态来调控基因转录[2]。Toh等研究还发现，MTA1在食管癌中的表达与其H4组蛋白的脱乙酰基活性相关[3]。经典的抑癌基因如p53、p21和Rb基因都受组蛋白乙酰化的调控[4]。高表达MTA1 mRNA的肿瘤细胞侵袭与淋巴结转移率明显升高。有鉴于此，我们对食管癌中的MTA1蛋白表达进行研究，确定MTA1基因在食管鳞癌中表达情况，以及该表达水平与肿瘤临床行为的相关性，为进一步探讨其在食管癌转移过程中的可能分子机制打下基础。 1 材料与方法 1.1 抗体 羊抗人MTA1多克隆抗体（Santa Cruz，sc9446）HRP标记羊抗鼠IgG（北京中山生物公司，ZB2305） 1.2 食管癌组织芯片临床病理资料 食管癌组织芯片由中国医学科学院肿瘤医院病理科吕宁教授提供。芯片共包含72例食管鳞癌患者的组织样本，就诊时间为2002～2003年。其中癌旁正常鳞状上皮组织67例，重度不典型增生组织42例，侵袭性癌组织70例，淋巴结转移癌组织20例。 1.3 免疫组织化学染色步骤 组织标本石腊包埋切片，常规脱腊至水；0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）进行抗原修复；1∶200稀释一抗，37℃作用1h；生物素标记的二抗IgG，37℃孵育30min；加HRP（辣根酶过氧化物酶）标记的链霉卵白素37℃作用30min；冲洗后DAB显色复染封片。 1.4 免疫组织化学评分 1.4.1 MTA1各种组织中的核染色评分标准如文献[5]所述。最终评分范围为0～12分。我们将最终评分8～12定义为强表达，4～8 为中等表达，0～4为弱表达。 1.4.2 MTA1蛋白的细胞浆染色按以下标准来进行：（a）阳性，组织中细胞浆着色的细胞数≥20%；（b）阴性，组织中上皮细胞或肿瘤细胞的细胞浆着色数lt;20%。 1.5 统计学处理 实验中的数据分析用SPSS11.0进行分析。食管癌不同发展阶段组织之间以及不同侵袭程度组织之间MTA1表达差异用方差分析进行显著性检验。细胞浆与细胞核MTA1阳性率差异用双侧卡方检验进行显著性分析。Plt;0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 不同进展阶段食管鳞状细胞癌的MTA1的表达水平 组织芯片染色质量满意，见图1。在正常食管鳞状上皮细胞，MTA1蛋白在细胞核中低表达，而在不典型增生细胞中，MTA1表达水平增高。在侵袭性癌细胞与转移癌细胞中，MTA1阳性细胞数量及染色强度均明显增高。在研究的样本中，从正常食管鳞状上皮到侵袭癌细胞，MTA1核表达水平随着肿瘤发生阶段的进展而升高，见图2a～c。 72例正常食管鳞状上皮、不典型增生、侵袭癌和淋巴结转移癌的MTA1表达评分分别为2.93±1.81,6.32±2.72, 8.28±2.43和6.95±2.17。不典型增生细胞、侵袭癌细胞与转移癌细胞细胞中MTA1表达水平均高于食管正常鳞状上皮细胞 (Plt;0.01)。侵袭癌细胞中MTA1表达水平高于不典型增生细胞，且统计学意义显著 (Plt;0.01)。转移癌细胞中MTA1核表达水平低于侵袭癌细胞，但统计学意义不显著，见图2c,d。 2.2 从正常食管鳞状上皮细胞至侵袭癌的进程中，MTA1弱表达的样本比例逐渐降低，而MTA1强表达的样