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糖尿病大鼠心肌组织中bcl 【关键词】 糖尿病；,,心肌细胞；,,bcl 　　摘要： 目的：探讨糖尿病大鼠心肌组织中bcl2的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法：按体重随机分为正常对照组(10只)和实验组(10只) ,各组大鼠禁食12h 后,实验组大鼠以60mg/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/ L、pH = 4.4 的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ 溶液),正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。一周后,采尾血测血糖,以血糖浓度gt;16.6mmol/ L、饮水量gt;40 ml/d 、尿糖强阳性( + + + ～ + + + + )的大鼠作为糖尿病大鼠。将糖尿病模型组和对照组大鼠处死,切取心室肌组织,进行组织切片和免疫组织化学实验观察。结果：糖尿病模型组心肌细胞Bcl2表达的平均光密度及阳性面积率与对照组心肌细胞比较有显著性差异（P＜0.01)。结论：糖尿病导致的心肌病与心肌细胞凋亡等有关。 　　关键词： 糖尿病； 心肌细胞； bcl2； 细胞凋亡 　　糖尿病性心肌病是糖尿病的慢性并发症之一,是糖尿病发病过程中特异性的心肌受损和心脏功能改变,糖尿病性心肌病的出现可以不伴有缺血性病变、血管病变及高血压等并发症。目前糖尿病性心肌病的确切病因还不清楚,但目前认为糖尿病性心肌病的发生主要与心肌能量代谢紊乱、Ca2+超载、血管动脉硬化、氧化应激、高血压及高血糖导致的心肌细胞凋亡等有关。本研究采用免疫组织化学方法，研究了糖尿病心肌组织中bcl2 及bax 蛋白表达情况，旨在探讨糖尿病所致心肌细胞凋亡现象。 　　1 材料与方法 　　11 材料 　　昆明种SD大鼠20只,雄性,体重180～200g,由武汉大学医学院实验动物中心提供,适应饲养1周后进行实验。 　　12 方法 　　121 糖尿病模型制备及分组 按体重随机分为正常对照组(10只)和实验组(10只) ,各组大鼠禁食12h 后,实验组大鼠以60mg/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/ L、pH = 4.4 的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ 溶液),正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。一周后,采尾血测血糖,以血糖浓度gt; 16.6mmol/ L 、饮水量gt;40 ml/ d 、尿糖强阳性( + + + ～ + + + + )的大鼠作为糖尿病大鼠。将糖尿病模型组和对照组大鼠处死,切取心室肌组织,进行组织切片和免疫组织化学实验观察。 　　122 主要试剂和仪器 浓缩型鼠抗人Bcl2单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）；超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒（福州迈新公司）；DAB显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。YWY781型医用微波仪(浙江临安电子器材厂生产)；家用高压锅。 　　123 方法 免疫组织化学SP法检测Bcl2抗原，其主要步骤如下：① 组织切片5 μm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；② 3%过氧化氢，37℃孵育10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③ Bcl2采用微波抗原修复（3档，10 min）， PBS洗4×5min；④ 正常羊血清37℃孵育10 min以减少非特异性反应；⑤ 一抗（Bcl2，1:50 )37℃孵育1 h，PBS洗4×5min；⑥ 生物素标记的二抗，37℃孵育10 min，PBS洗4×5min；⑦ 链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物37℃孵育10 min，PBS洗4×5min；⑧ DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；⑨ 苏木精复染，脱水，透明，封片。 　　用PBS代替一抗作为阴性对照组，人扁桃体作为Bcl2阳性对照组。 　　124 免疫组织化学结果判断 ① Bcl2相关抗原以胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞核和胞浆内无棕黄色反应物。② 采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对Bcl2的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值（阳性面积率＝单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100％）。 　　125 统计学处理 对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNKq检验，检验水准α为0.05。 　　2 结果 　　对照组心肌细胞胞浆内可见较多棕黄色颗粒，糖尿病模型