PCR讲座开题报告.pptVIP

目 录 PCR的概念 PCR技术的创建 PCR的原理 PCR的反应体系和方法 PCR的常见问题 PCR的类型和应用 PCR技术的概念 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称ＰＣＲ技术，是８０年代中期发展起来的一种体外扩增特异ＤＮＡ片段的技术。此法操作简便，用一对寡聚DNA作为引物，通过加温变性－退火－DNA合成这一周期的多次循环，可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的ＤＮＡ序列的拷贝。由于这种扩增产物是以指数形式积累的，经25－30个循环后，扩增倍数可达106。 （2) 序列应位于高度保守区，与非扩增区无同源序列。 （3）碱基尽可能随机分布，G+C占40-60%，过高或过低都不利于引发反应。 （4）引物3’端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A 的错配效率明显高于其他3 个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。 二. PCR方法步骤 １．向无菌的200μl Eppendorf管中依次加入以下溶液。 Buffer，dNTP，MgCl2，无菌水，Taq酶，引物，模板。 经典循环参数（1000bp以内） PCR常见问题 一.没有扩增产物 a．需检查一下Taq DNA聚合酶是否失活，或是活性太低，还需查一下在加样过程中是否向体系中加过