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凝集效价及吸收试验 段佳慧 凝集效价的测定 1.取20支小试管，分两排放置于试管架上，前排标明A,后排标明B,再将各排由左而右注明号码。 2.各管均加生理盐水0.2ml。 3.吸取A型被测血清0.2ml,加入A排第1管中，混匀，吸出0.2ml加入第2管中，如此稀释至第10管，从第10管吸出得0.2ml弃掉，用同样的方法取B型被测血清在B排中稀释，最后两排管的血清稀释倍数分别为 凝集效价的测定 1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1024. 4.A排管各加B型2%RBC生理盐水悬液0.2ml;B排管各加A型2%RBC生理盐水悬液0.2ml;混匀。 5.放置室温1~2h观察结果，以稀释倍数最高而又显凝集者为其凝集效价。 吸收试验 概述 本实验用以间接证明RBC上的血型抗原及其强度。常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集RBC的定型以及多种原因引起RBC血型抗原减弱时的定型及法医学检查等。 实验原理 将被检RBC或含有血型物质的唾液、毛发等被检测品加入已知效价的标准抗A及抗B血清后，若RBC或其他被检品中含有相应的抗原，变吸收血清中的抗体。吸收后血清以已知抗原的RBC来滴定效价，比吸收前血清效价显著下降或完全消失，便可证明受检RBC上或被检物中有与标准血清中抗体相对应的抗原。从而间接推知被检RBC或毛发等的血型及其亚型的种类。 仪器及用具 试管、吸管、4℃冰箱、离心机、显微镜等。 试剂 抗-A、抗-B标准分型血清、2%A型B型标准RBC盐水悬液。 标本 受检RBC。 操作 分离血标本，将血清和红细胞分别做好标记。 将受检RBC分成两管，用等渗盐水洗涤3次，然后除尽盐水。 将标准抗-A、抗-B血清倍比稀释，分别加入等量2%A型B型标准RBC盐水悬液，室温下放置15min后，1000r/min，1min离心，观察凝集结果。选择出凝集程度最高1管稀释度作为标定血清。 抗体吸收 取2支小试管，分别标记抗-A、抗-B；并分别加入相应标定血清0.5ml;再分别加入等量压积RBC；混合，放4℃冰箱中至少1h，每10min混合1次，使RBC充分吸收抗体。然后1000r/min离心，取上清液，标记为抗-A、抗-B吸收液。 于试管架上排列小试管4排，每排5支，每管各加生理盐水0.2ml，第1、3两排第1管分别各加抗-A、抗-B吸收液0.2ml；第2、4排第1管分别各加未吸收抗-A及抗-B血清0.2ml。然后，分别用1：2倍稀释法稀释至1：32. 在第1、2两排试管中每管各加2%A型红细胞生理盐水悬液0.2ml，第3、4排每管中加入2%B型红细胞生理盐水悬液0.2ml；充分混匀，1000r/min离心1min。 观察结果 吸收后抗体效价较吸收前降低2个滴度以上者为阳性。吸收后抗-A效价较未吸收抗A 效价显著降低或消失为A型；吸收后抗B效价较未吸收抗B效价显著降低或消失为B型；吸收后抗A及抗B效价效价较未吸收抗A及抗B效价显著降低或消失为AB型；吸收后抗A及抗B效价效价较未吸收抗A及抗B效价无明显差异者为O型。 质量控制 1.本试验中所用的抗-A、抗-B血清效价不宜过高，应先将抗血清效价稀释到32为宜。因为如果抗血清效价太高，抗血清被A亚型RBC吸收后，效价下降不明显，难以判断结果。 2.RBC经洗涤压积，盐水应尽量去尽，以免抗血清被稀释。 3.吸收试验的温度，根据抗原、抗体反应的最适温度来决定。ABO系统以4℃为宜，Rh系统以37℃为宜。 4.所用仪器符合质量要求。 *