第三章 生物制品的制备 生物制品学 教学课件.pptVIP

第三章 生物制品的制备 Preparation of biopreparate 第一节 一般生物制品的制备方法  (Preparation of general bio-preparate ) 一、生物制品原料的选择、预处理与保存方法 （Selection、pretreatment and preservation of raw material of biopreparate） （1）原料选择 原料的选择原则： ①有效成分含量高，新鲜； ②原料来源丰富，产地较近； ③原料中杂质含量少； ④原料成本低等。 原料的保存方法主要有： ①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。 ②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。 ③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。 二、生物制品的提取（extraction） (1)生物组织与细胞的破碎（smash of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法： ①磨切法，该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。 ②压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西压釜、细菌压等使用效果良好。 ③反复冻融(freeze thawing)法，设备简便，活性保持好，但用时较长。 ④超声波振荡破碎(ultrasonic oscillation crash)法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。 ⑤自溶法(autolyze method)或酶解法(enzymolysis method)，用得较少。 （2）提取（extraction） 生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质， ①选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂（如氯仿、丙酮等）。 ②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。 ③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。  七、氨基酸类制品的分离纯化方法 （Separation and purification of Aa） （1）氨基酸的生产方法 (production of Aa) 蛋白质水解法(protein hydrolysis)：水解法有酸水解(acid hydrolysis )、碱水解(base hydrolysis)和酶水解(enzyme hydrolysis)三种。 ①用盐酸水解(HCl hydrolysis)为常用方法，其优点是水解迅速、完全，产物全部是L—型氨基酸，缺点是色氨酸全部被破坏，丝氨酸等部分被破坏。 ②碱水解法(alkali hydrolysis)易产生消旋作用，较少应用。 ③酶水解法(enzyme hydrolysis)水解不够完全。 （2）氨基酸的分离方法(Separation of Aa )有沉淀法(precipitation) 、吸附法(adsorption)和离子交换法（ion-exchange ) 。 沉淀法(precipitation)：根据形成沉淀的原理不同分为两种：①是依据不同氨基酸在水中或其他溶剂中的溶解度差异进行沉淀分离。②是用特殊试剂沉淀某种氨基酸，如用邻二甲苯-4-磺酸与亮氨酸形成不溶性盐沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游离出来。 吸附法(adsorption)：这是利用吸附剂根据氨基酸吸附力的差异进行氨基酸分离的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分离就是利用活性炭对其吸附的原理。 离子交换法（ion-exchange )：氨基酸是两性电解质，在一定pH条件下，不同氨基酸带电性质及解离状态是不相同的，因此在离子交换剂上被吸附的强度不同。常用的离子交换剂为强酸型阳离子交换树脂，洗脱主要用pH梯度洗脱。 2）亲和层析有如下特点（Characteristics of Affinity Chromatography） 纯化过程简单、迅速. 分离效率高。 产物纯度高。 必须针对某一分离对象制备专一的配基及寻求稳定的层析条件。 因此应用范围受到一定的限制。 8）载体、配基、目的物的连接（Conjunction of vector、ligand and target material） 载体（Vectors or Matrix） + 配基（Ligand） + 目的物（target material） Fig AC relies upon a reversible highly