实验五_RT-PCR(逆转录.pptVIP

* * 实验五 RT-PCR ---逆转录 一 实验目的 掌握逆转录的基本原理和方法。 逆转录也称反转录，是某些生物（如鸡的肉瘤病毒、HIV等）的特殊复制方式。它们的遗传信息载体是RNA 而不是DNA。因此，在感染细胞时，首先经过逆转录作用成为双链DNA，才能整合到宿主基因组中去。 这个过程由逆转录酶催化，它具有以RNA为模板合成DNA。 逆转录现象和逆转录酶是分子生物学研究中的重大发现，是对经典中心法则重要补充。 二 实验药品 模板RNA dNTP 随机引物 反转录酶AMV或M-MLV 5×buffer Rnase Inhibitor 三 实验步聚 反转录体系 第一步： 混样制备 模板RNA 2uL X（体积）×N(样本数）×1.1 dNTP 2uL 随机引物 2uL DEPC水 4uL 70℃ 5min 4 ℃ 10min 第二步： 混样制备 反转录酶AMV或M-MLV 0.5uL X（体积）×N(样本数）×1.1 5