2017整理医学免疫学 第12讲 免疫检测与防治.ppt

第二节 免疫细胞的测定 淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。 一 、淋巴细胞的分离 常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（PBMC），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离T细胞，可用尼龙毛柱、抗CD3单抗、E花结试验等分离。 二、免疫细胞细胞的鉴定 根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同类型和比例。 （一）T细胞功能测定 1. T细胞增殖试验 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等丝裂原及抗CD3单抗等能非特异性激活培养的T细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。 淋巴细胞功能测定 在该增殖过程中，细胞DNA、RNA、蛋白质的合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原致敏的T细胞。 （1）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁仪），易有放射性污染。 （2）MTT法：该法操作简单，无放射性污染，但敏感性相对较差。 淋巴细胞功能测定 2. 细胞毒试验： Tc、NK细胞对靶细胞有直接杀伤作用，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶细胞。 （1）51Cr释放法：用51Cr标记靶细胞，γ记数仪测定释放的51C活性。 （2）MTT法：其原理与增殖试验相同，但甲 生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。 （3）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。 3 细胞因子检测： CK的检测有助于了解其在免疫调节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检测方法有以下三种： （1）ELISA法： （2）生物活性测定法： （3）聚合酶链反应（PCR）： 淋巴细胞功能测定 4 皮肤实验 正常机体对某种抗原产生细胞免疫后，用相同抗原做皮肤试验时出现以局部红肿为特征的DTH。细胞免疫正常时出现阳性反应，细胞免疫低下则呈阴性反应。 该方法简便，可帮助诊断某些病原微生物感染（如结核杆菌、麻风杆菌等）及免疫缺陷病等。 淋巴细胞功能测定 （二）B细胞功能测定 B细胞介导体液免疫，检查B细胞的数量与功能是确定体液免疫是否正常的重要手段。 1 B细胞增殖试验 2 抗体形成细胞的测定：吸附有特异性抗原的SRBC与抗体形成细胞分泌的Ig特异性结合后活化补体，溶解SRBC。又称溶血空斑试验。 第三节 免疫治疗 针对异常的免疫状态，应用免疫制剂、免疫调节药物或其他措施来调节或重建免疫功能，以达到治疗疾病的目的。 2.疫苗 ⑴灭活疫苗（死疫苗）与减毒活疫苗 活疫苗：人工的方法使病原体减毒或从自然界 筛选病原体无毒株或微毒株所制成的活的微生 物制剂。也称减毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。 死疫苗：选用免疫原性强的病原微生物，经人工 大量培养，经理化方法将其杀死后制成的疫苗。 无毒力，但仍保持其免疫原性。伤寒、百日咳、 钩端螺旋体、斑疹伤寒、乙型脑炎等疫苗 死疫苗与活疫苗特点的比较 含义：细菌外毒素经0.3～0.4%甲醛处理。 ⑵类毒素 特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。 ⑶新型疫苗 亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。 食用转基因植物以预防接种已初步成功。 含义：细菌外毒素经0.3～0.4%甲醛处理。 ⑵类毒素 特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。 （二）人工被动免疫 1.定义：给人体注射含特异性抗体的 免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗 或紧急预防感染的措施。 2.制剂 ⑴抗毒素：细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的血清。 注意：对人而言既是抗体也是抗原，因而要防止超敏反应的发生，使用前需皮试。 举例：破伤风抗毒素，白喉抗毒素 ⑵人免疫球蛋白制剂：混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂。 举例：肝炎、麻疹、脊髓灰质炎。 ⑶细胞因子和单克隆抗体： IFN-γ IFN-α、 G-CSF、GM-CSF、 IL-2，人源单抗。 举例：肿瘤、艾滋病有效预防手段。 （三）人工主动与被动免疫的特点比较 3.计划免疫 免疫增强疗法 免疫抑制疗法 感染、肿瘤 超敏反应、自身免疫病、 移植排斥反应、严重炎症 免疫重建疗法 再障、免疫缺陷 主动免疫治疗 被动免疫治疗 刺激或增强机体免疫系统，使机体自身产生抵抗疾病的能力 输注免疫效应细胞或分子，发挥治疗疾病的作用 又称 过继免疫疗法 特异性免疫疗法 非特异性免疫