2017整理南医大微免实验：形态综合.pptVIP

对流免疫电泳 材料 电泳仪 缓冲液 琼脂板1块/2人，打孔器2个/组， 抗AFP血清 —— 已知Ab AFP阳性血清 —— 阳性Ag 对照阴性血清 —— 阴性Ag 待检血清：标本1 —— 未知Ag 标本2 —— 未知Ag 对流免疫电泳 方法 打孔 加样 电泳35min 对流免疫电泳 结果判定： 在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。 * * 实验内容 录像：淋转、E花环 介绍：免疫学检测技术（书229） 示教：淋转、E花环 单扩、双扩、火箭电泳 操作：对流免疫电泳 淋巴细胞转化试验 转化百分率正常值为70%左右 分裂相：即染色体型 母细胞：大4-5倍；核质疏松，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡 过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡 小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少 示教片 E玫瑰花环试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞。 示教片 一、抗原抗体反应的原理 1、基础：抗原决定簇——抗体的互补决定区 2、特点：特异性 可逆性 比例性 阶段性 二、抗原抗体反应的影响因素 1、电解质 2、温度 3、酸碱度 三、抗原或抗体的检测方法 凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术 凝集反应 概念：抗原 + 抗体 凝集团块 直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体 凝集团块 玻片法、试管法 间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体 凝集团块 反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原 凝集团块 协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原 凝集团块 沉淀反应 概念：可溶性抗原 + 抗体 沉淀物 单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向） 双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、 抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向） 单向琼脂扩散 单向琼脂扩散试验是一种定量试验。 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。 主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量 单向定量免疫电泳（火箭电泳） 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。 敏感度与单扩相仿，但需时较短。 双向琼脂扩散 在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分 对流免疫电泳 打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。 加样：抗AFP血清加于抗体孔内；病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。 电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电30分钟。 观察：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。 － ＋ Ag Ab Ag Ab 4~5mm 4~5mm 5mm 5mm 阴性 阳性 标1 阴性 标2 阳性