第八课双向凝胶电析.pptVIP

第八课 双向凝胶电泳 概述 原理IEF，SDS双向凝胶电泳分离操作 双向凝胶电泳检测 双向电泳分离技术的优缺点 DI GE技术 一、双向凝胶电泳概述 双向电泳的思路最早由Smithies和Poulikc提出，蛋白质第 一向电泳是根据其自由溶液迁移率(free-solutionmobility)， 在滤纸条上进行；第二向电泳方向与第一向垂直，在淀粉胶 上进行。 随着聚丙烯酰胺凝胶的发明，双向电泳支持介质逐渐转向 聚丙烯酰胺凝胶，即双向凝胶电泳。1969年，双向凝胶电泳 在原理上有了新的发展，以第一向为蛋白质等电聚焦的双向 凝胶电泳建立起来(即IEF)。 20世纪70年代初，第二向电泳中使用了十二烷基硫酸钠 (SDS)，使第二向电泳基本上根据蛋白质的相对分子质量来 分离，从而奠定了现代双向凝胶电泳的基础(即IEF-SDS PAGE)。1975年，O‘FarrellL、Kloset和Scheele分别对双向 凝胶电泳做进一步的优化，建立了高分辨的双向凝胶电泳。 双向电泳分析中的样品制备 制备原则： 应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态（包括多数疏水性蛋白），且制备方法应具有可重现性。 防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。 防止在样品制备过程中发生样品的抽提后化学修饰（如酶性或化学性降解等）。 完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。 尽量去除起干扰作用的高丰