实验2微生物培养基的配制和灭菌（参考）.pptVIP

实验二 培养基的配制和灭菌 目 的 要 求 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 学习并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作技术 实 验 原 理 由人工方法配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质称为培养基。主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏或积累代谢产物等方面。 可按组成成分和物理状态进行分类。 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的高压蒸汽灭菌锅中进行的，通过加热，产生大量蒸汽使其中压力升高，从而得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 实 验 材 料 各种药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂等； 称量工具：托盘天平、量筒、称量纸、角匙； 分装工具：铁架台、漏斗、pH试纸； 包扎工具：牛皮纸、扎绳、棉花。 实 验 程 序Ⅰ（培养基的配制与分装 ） 1配方： NaCL 0.5％、蛋白胨 1％、牛肉膏 0.3％，琼脂1.5-2.0％， pH7.2-7.4 (使用10％ NaOH和 5％ HCL调节)。 2配制： 称量及加热溶化----加琼脂----定容----调pH----分装、加塞、包扎。 3分装： 每组装3个三角瓶，150ml/瓶，包扎、灭菌。将剩余的250ml分装大试管（装量为试管长度的1/5），加棉球，包扎、灭菌。 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨培养基） 平板计数琼脂（PCA）Plate Count Agar1000ml 配方：? ?胰蛋白胨? ???5.0g ；酵母浸粉? 2.5g；葡萄糖 ? 1.0g? ?琼脂? ?? ?? ?15.0g；蒸馏水? 1000ml；pH 7.0士0.2 制法：? ?将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。? 成品用法：称取本品??23.5g,加热搅拌溶解于?1000ml?蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌?15?分钟,备用。 1配方： K2HPO4 0.1% MgSO4.7H2O 0.05% FeSO4 0.001% （加3滴即可） KCL 0.05% NaNO3 0.2% 葡萄糖 3% 琼脂2% 。 2配制： 称量及溶化----加琼脂----定容----分装、加塞、包扎 3分装： 平均分装在两个三角瓶中，包扎、灭菌。 霉菌培养基（察氏一号培养基） （一）配方（PDA）?马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15—20g，自来水1000ml，pH自然。 （二）制作方法 1、制滤液?：?马铃薯刮去粗皮，去芽眼，切成碎块，称量后放锅中，加水1200—1300ml，将其煮沸20min。用双层纱布过滤，取1000ml滤液。 PDA培养基的配制 2、化琼脂?? 将滤液加热至即将沸腾时加入琼脂，不断搅拌（控制火力不要使培养基溢出或烧焦）。琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水不足水量）。 3、分装? 通过漏斗装置，趁热将培养基分装于试管中，装量约占试管高度的1/4（分装三角瓶，其装量以不超过其容积的一半为宜）。管口或瓶口不要沾染培养基。（如图） 4、包扎? 管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等，操作过程参见图。 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA)成品 配方：? 马铃薯浸粉? ???5.0g /L；葡萄糖 ?20.0g /L? ?琼脂? 20.0g /L?；氯霉素0.1g /L。 制法：? ?称取40g溶于1L蒸馏水中，煮沸溶解。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。? 放线菌培养基（改良高氏1号） 配方： ? 硝酸钾1.0g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，氯化钠0.5g/L，可溶性淀粉20.0g/L，琼脂15.0g/L. 制法：? ?称取37.5g加热溶于1L蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，冷却至50-55?℃时，每300ml培养液中加入3%重铬酸钾1ml，混匀，倒入无菌平皿。 实 验 程 序Ⅱ（准备工作 ） ★ 取6支小试管各加生理盐水9ml, 包扎灭菌。 ★ 取1只三角瓶加99ml水及10~15粒玻 璃球，包扎灭菌。 1.灭菌器内加入一定量水，将包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热。 3.排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；（或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm