药物稀释法与管碟法的抗菌试验幻灯片.pptVIP

抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验 第二大组：唐鹏程 张君曼 许杰生 肖伟亨 谢秋惠 蒋铭强 李淑霞 郑慧珠 陈芃仲 李文婷 张妮 何磊 抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验 选取药物：氯霉素滴眼液 规格：8ml 20mg 国药准字 批号 130115 菌种：藤黄微球菌（Micrococcus luteus ） 研讨会 试验方法： 1.预试验 1.1复苏：取藤黄微球菌（Micrococcus luteus ）冻干粉一支自然解冻，准备一瓶灭菌好的营养肉汤100ml，无菌操作，（37℃,24h）摇床培养。 1.2琼脂斜面：取复苏好的藤黄微球菌（Micrococcus luteus ）用接种环顶点沾一下在灭菌好的斜面划线（37℃,24h）培养即可。 菌液制备： 从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h即可，4℃保存。 确定梯度 从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉 汤培养基中，经37℃培养6h取出，在无菌操作下，用生理盐水稀释至，取，，做细菌总数计数。 稀释梯度至，细菌总数计数表 一．试管法（无菌操作 2.1预实验（2批）：取营养肉汤100ml，试管10支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉汤混匀，第三管取第二管1ml+9ml肉汤混匀，以此类推至第九管，取出1ml弃去，第十管不加药，只加了营养肉汤9ml。稀释完毕后，十管的药物稀释度为，，…，，及阴性。 2.2菌液制备： 在上述的1.3中，菌液制备最后所得的菌液中取1ml用营养肉汤作为稀释剂梯度稀释至，用灭过菌的移液枪每管加0.05ml，第九管不加菌作为阴性对照，第十管不加药物加菌为阳性对照。加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。 2.3确定（最大抗菌效价，6批）：每批取营养肉汤100ml，试管7支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中2ml+18ml肉汤混匀，第三管取第二管10ml+10ml肉汤混匀，第四管取第三管10ml+10ml肉汤混匀，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，第七管不加菌作为阴性对照，第八管不加药物加菌为阳性对照。药物稀释度为1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000，加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。 药物稀释法找出最大抗菌效价表，加菌量0.05ml 二、管碟法（2批） 3.1菌液制备：每批取营养肉汤100ml，试管6支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中2ml+18ml肉汤混匀，第三管取第二管10ml+10ml肉汤混匀，第四管取第三管10ml+10ml肉汤混匀，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，药物稀释度为1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000。 3.2培养基的制备： 1、先倒下层（抗生素效价2号培养基，倒入6个平皿凝固。） 2 菌液制备（营养琼脂斜面加入2ml生理盐水混匀洗脱，倒入40ml抗生 素效价2号培养基混匀，作为上层。） 3、从40ml中每皿分别取5ml迅速加入6个平皿中，混匀，凝固后作好标记。（每皿做四个 标记,1/10 两个，1/100 两个，1/200 两个，1/400 两个，1/800 两个，1/1000两个.。） 4、每皿加入4个牛津杯，滴加药液到小钢管中，分别按浓度加入1/10两个，1/100两个， 1/200两个，1/400两个，1/800两个，1/1000两个。 5、将平皿盖换成陶瓦盖。 6、恒温培养。（24h，37℃） 7、记录结果 试验结果：本试验所采用的藤黄微球菌在抗生素效价2号培养基中，正常情况下均为混浊生长，培养基经培养正常，保持原来一样状态，在长满细菌的平皿中无出现抑菌圈 为抑菌（杀菌），以出现抑菌圈 的药液，最高稀释倍数为该药的抑菌效价，由管碟法测定最大抗菌效价表，可知1:400为最大稀释倍数，最大抗菌效价为2500/400=6.25u。 讨论：由药物稀释法与管碟法的抗菌试验两者都可以直观看到结果，药物稀释法操作简单快捷，管碟法操作复杂，技术要求较高。药物稀释法的抗菌效价计算较为简单，管碟法无法计算其抗菌效价。 1 无法计数 158 44 2 无法计数 144 52 平均菌落